[发明专利]利用血红素辣根过氧化物酶催化比色检测三价砷的方法

权利要求书

1.一种三价砷光敏性的实现方法，其特征在于，通过将三价砷依次与砷核酸适配体母液和氯化血红素混合，然后加入H₂O₂溶液和3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液进行反应生成联苯醌，实现联苯醌在442nm波长处的吸光度的变化量与三价砷浓度呈正向关系。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的反应中，三价砷含量维持在10-100ppb。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的砷核酸适配体母液中的砷核酸适配体序列为：

5’-GGTAATACGACTCACTATAGGGAGATACCAGCTTATTCAATTTTACAGAACAACCAACGTCGCTCCGGGTACTTCTTCATCGAGATAGTAAGTGCAATCT-3’；其浓度为500μM。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的H₂O₂溶液的浓度为200mM；所述的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺的浓度为5mM。

5.一种利用血红素辣根过氧化物酶催化比色检测三价砷的方法，其特征在于，通过构建含有已知三价砷浓度的检测体系后，采用多功能酶标仪计进行吸收光谱扫描得到吸光度变化量标准曲线，然后将待测对象与超纯水，即对照样分别和氯化血红素混合后加入三价砷溶液，然后通过加入H₂O₂溶液和3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液进行反应，最后对两个反应产物在442nm波长处的吸光度的差值对照吸光度变化量标准曲线得到待测对象中的三价砷浓度。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征是，所述的检测体系通过以下步骤制备得到：

1)制备已知浓度的三价砷检测体系：取5支包含5μL浓度为500μM三价砷核酸适配体和5μL不同浓度三价砷标准液的离心管，使得整个检测体系中的三价砷含量维持在10-100ppb，在25℃条件下孵育30分钟；然后分别加入100μL氯化血红素并置于25℃条件下孵育10min；在上述混合液中加入100μL200mM H₂O₂溶液和50μL5mM3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液充分混匀后再将离心管置于25℃条件下孵育15min作为标准溶液留作以下测定用；

2)取一支离心管将三价砷标准溶液用5μL超纯水替代，其他按步骤1处理后作为空白对照体系溶液。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征是，所述的吸光度变化量标准曲线是指：采用多功能酶标仪计进行吸收光谱扫描得到442nm处的吸光度，将不同浓度的标准溶液和空白对照体系溶液的吸光度差值作为纵坐标，三价砷混合液的浓度作为横坐标得到的回归方程，即标准曲线。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征是，所述的扫描为采用96孔酶标板盛放检测体系，吸光度测定波长为442nm的吸光度，全波长扫描范围为400-800nm。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征是，所述的标准曲线为y＝0.0016x+0.11643。