[发明专利]重组Tβ4-BP5融合肽、基因、工程菌及应用

权利要求书

1.重组Tβ4-BP5融合肽，其特征在于，该融合肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

2.一种编码权利要求1所述的重组Tβ4-BP5融合肽的基因，其特征在于，该融合肽基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求2所述的一种编码重组Tβ4-BP5融合肽的基因，其特征在于，所述融合肽基因由胸腺素β4基因和法氏囊五肽BP5基因通过柔性连接肽Linker基因串联而成，并在5’端加有肠激酶识别位点基因序列。

4.一种表达权利要求1所述的重组Tβ4-BP5融合肽的工程菌，其特征在于，该工程菌的构建方法包括以下步骤：

1）重组Tβ4-BP5融合肽基因SOE-PCR扩增

根据猪大肠杆菌偏嗜密码子设计重组Tβ4-BP5融合肽基因，并针对该融合肽基因设计引物F₁、F₂和F₃，然后进行SOE-PCR扩增；将PCR扩增产物采用琼脂糖凝胶电泳鉴定后，切下目的条带进行回收，回收产物中片段大小为159bp的为重组Tβ4-BP5融合肽基因；

2）携带重组Tβ4-BP5融合肽基因的工程菌的构建

将重组Tβ4-BP5融合肽基因和质粒载体pET32a用EcoRI、XbaI双酶切，并将酶切的重组Tβ4-BP5融合肽基因和质粒载体pET32a连接，连接产物转化E.coli DH5α；提取质粒，并将重组表达质粒进行HindIII缺失酶鉴定；酶切鉴定为阳性的质粒测序，命名为pET32a-Tβ4-BP5；将重组质粒pET32a-Tβ4-BP5转化进入大肠杆菌BL21中，筛选阳性克隆，即为表达重组Tβ4-BP5融合肽的工程菌。

5.根据权利要求4所述的重组Tβ4-BP5融合肽基因的工程菌，其特征在于，所述引物

F₁：5’-CCGGAATTCACTGACAAACCTGACATGGCCGAGATCGAGAAATTCGACAAATCGAAGCTCAAGAAGACTGA-3’；

F₂：5’-TCTCCTGCTCGATCGTCTCCTTCGATGGTAGTGGATTCTTCTCTTGAGTCTCAGTCTTCTTG-3’；

F₃：5’-TCGAGCAGGAGAAGCAAGCTGGCGAGTCCGGCGGCGGCGGCAGCTGCAAAAATGTGTATTAATCTAGATCG-3’。

6.一种如权利要求1所述的重组Tβ4-BP5融合肽在作为免疫佐剂方面的应用。