[发明专利]携带透明颤菌血红蛋白基因的地衣芽孢杆菌的菌株、构建方法及应用

权利要求书

1.一种携带透明颤菌血红蛋白基因的地衣芽孢杆菌，其特征在于：所述菌株为地衣芽孢杆菌(pHY300-vgb)[Bacillus licheniformis(pHY300-vgb)]，该菌株保藏在位于武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M2011345，保藏日期为2011年10月12日。 

2.一种权利要求1所述携带透明颤菌血红蛋白基因的地衣芽孢杆菌的构建方法，其特征在于：质粒pDG1730-vgb⁺经BamH I和Hind III双酶切得到的1246bp vgb片段，该片段含有芽孢杆菌编码乙酰高丝氨酸内酯(AHL)自身诱导物(AI)合成酶luxS基因的启动子P_luxS和vgb ORF；质粒pHY300PLK经BamH I和Hind III双酶切得到4870bp线性质粒片段；1246bp vgb片段与4870bp线性质粒片段经DNA连接酶连接作用，得到表达载体pHY300-vgb；将表达载体pHY300-vgb转入大肠杆菌进行保存，其后通过电转化转入原始菌株——地衣芽孢杆菌(B.licheniformis DW2)，以四环素抗性为筛选标记，筛选得到地衣芽孢杆菌(pHY300-vgb)[Bacillus licheniformis(pHY300-vgb)]。 

3.一种权利要求1或2所述携带透明颤菌血红蛋白基因的地衣芽孢杆菌的应用，其特征在于：它在杆菌肽发酵中的应用。 

4.根据权利要求3所述携带透明颤菌血红蛋白基因的地衣芽孢杆菌的应用，其特征在于：地衣芽孢杆菌(pHY300-vgb)在杆菌肽发酵中的应用步骤包括：A菌种活化，B种子发酵，C生产发酵。 

5.根据权利要求4所述的携带透明颤菌血红蛋白基因的地衣芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述步骤A菌种活化的菌种活化培养基配方为：酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、NaCl10g/L，pH值为7.0-7.4； 

所述步骤A菌种活化的培养条件为从甘油管以体积百分比1%接种于装有5ml LB培养基的PA瓶中，180～300rpm，温度37℃，培养10～14h。 

6.根据权利要求5所述的携带透明颤菌血红蛋白基因的地衣芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述步骤B种子发酵的种子发酵培养基配方为：黄豆饼粉8～15g/L、玉米淀粉2.5～7.5g/L、CaCO₃0.5～2.5g/L、(NH₄)₂SO₄0.1～1.0g/L、花生饼粉0.5～2.5g/L，pH值为6.5～7.5； 

所述步骤B种子发酵的培养条件为将经步骤A菌种活化后的菌液以体积百分比1%接种后180～300r/min，温度37℃，培养10～12h。 

7.根据权利要求6所述的携带透明颤菌血红蛋白基因的地衣芽孢杆菌的应 用，其特征在于：所述步骤C生产发酵的生产发酵培养基配方为（g/L）：黄豆饼粉45～55g/L、玉米淀粉15～25g/L、CaCO₃4～8g/L、(NH₄)₂SO₄0.5～2g/L、花生饼粉4～8g/L、玉米浆6～14g/L，pH值为6.5～7.5； 

所述步骤C生产发酵的培养条件为500mL三角瓶装生产发酵培养基的液量为25～150mL，将经步骤B种子发酵后的菌液以体积百分比2%接种量，180～300r/min，温度37℃，发酵培养48h。