[发明专利]一种基于发光细菌法的大气颗粒物综合毒性检测方法

权利要求书

1.一种基于发光细菌法的大气颗粒物综合毒性检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤(1)样品的采集与保存：利用大气颗粒物采样器采集大气颗粒物样品，采样结束后，用铝箔纸包裹好样品滤膜，密闭低温保存，防止样品中毒性物质的损失；

步骤(2)样品的破碎：将载有大气颗粒物样品的滤膜剪成细小碎片，将全部碎片转移到100mL的具塞PC管底部；

步骤(3)样品的浸提：往有样品滤膜碎片的PC管中加入浸提液，置于恒温水浴振荡器上，进行振荡浸提，浸提出大气颗粒物样品中的毒性物质；

步骤(4)离心：充分浸提一段时间后，将上清液转移到离心管中，置于离心机上离心；

步骤(5)调节样品浸提液的pH值：离心后，取出离心管，取上清浸提液用氢氧化钠溶液调节pH至6～8之间；

步骤(6)二次离心：用离心机对已调节好pH的样品液再次离心；

步骤(7)样品的毒性检测：取二次离心后的浸提液上清液，利用SDIMicrotox Model 500温控毒性仪，测定其对发光细菌的15分钟发光抑制率，来表征大气颗粒物样品的毒性水平，每个样品平行测定3次，相对偏差不超过10％，结果取3次测定的平均值，其中，以空白滤膜按照大气颗粒物滤膜相同的处理方法得到的浸提液作为空白对照；

步骤(8)样品毒性的表达：采用发光抑制率、EC₅₀/TU、氯化汞当量浓度或氯化锌当量浓度来表示浸提液的综合毒性水平。

2.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的大气颗粒物综合毒性检测方法，其特征在于，本方法不仅适用于SDI Microtox Model 500温控毒性仪标配的费氏弧菌，还适用于明亮发光杆菌等海洋发光细菌。

3.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的大气颗粒物综合毒性检测方法，其特征在于，将载有大气颗粒物样品的滤膜剪成细小的碎片，以保证样品滤膜在浸提过程中能与浸提液充分接触，使浸提更加充分，测定结果更能准确反映样品真实的综合毒性水平，所述样品膜的破碎规格为0.1～0.5cm²。

4.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的大气颗粒物综合毒性检测方法，其特征在于，对样品膜进行浸提以提取其中的毒性物质，选择的浸提液为0.1mol/L的盐酸溶液，浸提液的加入量为40mL。

5.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的大气颗粒物综合毒性检测方法，其特征在于：样品的连续浸提是在恒温水浴振荡器上进行的，振荡速度为200转/分钟，振荡时间为16小时，水浴温度为15～25℃。

6.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的大气颗粒物综合毒性检测方法，其特征在于，调节样品液的pH时，计算样品液的体积，确定样品液中H⁺的量，用10mol/L的氢氧化钠溶液调节样品液pH值至6～8之间，样品液的体积增加量仅为1％左右；同时，调节pH产生的NaCl浓度低于费氏弧菌的最适反应盐度，不影响测定的结果。

7.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的大气颗粒物综合毒性检测方法，其特征在于，调节pH值前后进行了两次离心，步骤(4)和(6)的离心条件均为：转速3000转/分钟，时间10分钟。

8.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的大气颗粒物综合毒性检测方法，其特征在于，用SDI Microtox Model 500温控毒性仪检测浸提样品液对发光细菌-费氏弧菌15分钟的发光抑制率，用来表征大气颗粒物样品的综合毒性水平；或同氯化汞/氯化锌进行综合毒性的当量浓度比对，或者通过发光抑制率与稀释度的关系计算EC50值和TU值，来表征大气颗粒物的综合毒性水平。