[发明专利]扩展真核生物遗传密码

权利要求书

1.一种含有正交氨酰基-tRNA合成酶(O-RS)的真核细胞，其中，O-RS在真核细胞中优选地氨酰化带有至少一个非天然氨基酸的正交tRNA(O-tRNA)。

2.如权利要求1所述的细胞，其特征在于，O-RS氨酰化具有至少一个非天然氨基酸的O-tRNA的效率至少相当于具有SEQ ID NO.：86中所列氨基酸序列的O-RS的50%。

3.如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述至少一个非天然氨基酸包括两种或多种非天然氨基酸。

4.如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述O-RS或其部分由SEQ ID NO.：3-19中任一所列多核苷酸序列或它们的互补多核苷酸序列编码。

5.如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述O-RS包含SEQ ID NO.：36-47或86中所列氨基酸序列或它们的保守变异。

6.如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述O-RS氨酰化具有至少一个非天然氨基酸的O-tRNA比O-RS氨酰化具有天然氨基酸的O-tRNA至少更有效10倍。

7.如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述O-RS包含与天然产生的酪氨酰氨酰基-tRNA合成酶(TyrRS)的氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列，并包含两种或多种选自下组的氨基酸：

A)与大肠杆菌TyrRS的Tyr37相对应位置上的缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或苏氨酸；

B)与大肠杆菌TyrRS的Asp182相对应位置上的苏氨酸、丝氨酸、精氨酸或甘氨酸；

D)与大肠杆菌TyrRS的Phel83相对应位置上的甲硫氨酸或酪氨酸；和

E)与大肠杆菌TyrRS的Leul86相对应位置上的丝氨酸或丙氨酸。

8.如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述O-RS来自非真核生物。

9.如权利要求8所述的细胞，其特征在于，所述非真核生物是大肠杆菌或嗜热脂肪芽孢杆菌。

10.如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述真核细胞是酵母细胞、哺乳动物细胞、植物细胞、藻类细胞、真菌细胞或昆虫细胞。

11.如权利要求10所述的细胞，其特征在于，所述细胞是酿酒酵母细胞。

12.如权利要求1所述的细胞，其特征在于，与天然氨基酸相比，所述O-RS对于至少一个非天然氨基酸具有一种或多种改进或增强的酶性质，该性质选自：较高K_m、较低K_m、较高k_cat、较低k_cat、较低k_cat/k_m、较高k_cat/k_m。