[发明专利]白色念珠菌核酸层析检测试剂盒及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种白色念珠菌核酸层析检测试剂盒，包括PCR反应液和试纸条，所述试纸条由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫顺次搭接黏贴在底衬上组成；其特征在于试剂盒还包括PCR反应液，PCR反应液中含有上游引物F和下游引物R，上游引物F为5’TTGGTGGTGGTAGACATAGA3'，下游引物R为5'TCAGAACACTGAATCGAAAG3'；所述上游引物F5’端标记生物素，下游引物R5’端标记地高辛；所述结合垫上包被胶体金颗粒标记的鼠抗地高辛抗体，硝酸纤维素膜上有包被亲和素的检测线和包被羊抗鼠抗体的控制线。

2.如权利要求1所述白色念珠菌核酸层析检测试剂盒，其特征在于所述PCR反应液组成如下：23μL反应体系包括以下组分

3.如权利要求1或2所述白色念珠菌核酸层析检测试剂盒，所述PCR反应液中引物F5’端标记的生物素与硝酸纤维素膜上亲和素结合；引物R5’端标记的地高辛与结合垫上胶体金颗粒标记的鼠抗地高辛抗体结合。

4.如权利要求1或3所述白色念珠菌核酸层析检测试剂盒，其特征在于所述结合垫上包被胶体金颗粒粒径为25nm，1mL胶体金颗粒标记8.4μg鼠抗地高辛抗体，形成的胶体金-抗体复合物在结合点垫上的包被量为2mL/30cm。

5.如权利要求1所述白色念珠菌核酸层析检测试剂盒，其特征在于所述硝酸纤维素膜上检测线包被亲和素浓度为0.5mg/mL，包被量为1μL/cm；控制线上包被羊抗鼠抗体浓度为1mg/mL，包被量为1μL/cm。

6.如权利要求1-5所述白色念珠菌核酸层析检测试剂盒，其特征在于所述试纸条外部设置塑料卡盒，塑料卡盒上依次设置凹孔和观测口，所述试纸条的样品垫放置于凹孔对应处，硝酸纤维素膜上设置的质控线和检测线在观测口对应处。

7.如权利要求1-6中任一权利要求所述白色念珠菌核酸层析检测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：

1）取出含有PCR反应液的反应管，待溶化后2000转/分离心30秒；

2）向反应液管中加入2μL样品DNA，混匀；

3）将上述反应管置于普通PCR仪中，95℃变性3min后，95℃变性45s，55℃退火45s，72℃延伸45s，进行30个循环，之后72℃延伸10min，完成PCR扩增；

4）将上述10μL的扩增产物与90μL的样品稀释液进行混合；

5）取出试纸条平放于水平桌面上，将上述混合液加在试纸条样品孔中；

6）反应10min后，根据试纸条层析情况判断检测结果，完成样本检测；

结果判定：出现两条红线，一条检测线，一条质控线，表示样品中存在白色念珠菌；仅出现一条红线（在质控线），则样品中不存在白色念珠菌。

8.一种白色念珠菌核酸层析检测试剂盒在检测样品中白色念珠菌中的应用。