[发明专利]一类以荧光素类似物为母体的荧光染料的合成和应用

权利要求书

1.一类以荧光素类似物为母体的新型荧光染料，具有通式I的结构：

其中：

m为0、1、2或3；

M选自H，K⁺，Na⁺，-R₁₀，-OR₁₀和-(CH₂)_n-O-R₁₀；R₁₀为C_1-18烷基，n为1-18的整数；

R₀选自H、F、Cl、Br和I；

R’选自H、乙酰基、丙烯酰基、2，4-二硝基苯磺酰基、2，3，4，5，6-五氟苯磺酰基、硼酸基、丁烯基；

R选自H、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈和R₉；

X为C(CH₃)₂、O、S或Se；

Y^-为负离子。

2.权利要求1所述的荧光染料，其特征在于，所述的m为1。

3.权利要求1所述的荧光染料，其特征在于，所述的R₀选自H、F、Cl。

4.权利要求1所述的荧光染料，其特征在于，所述的R’选自H、乙酰基、丙烯酰基。

5.权利要求1所述的荧光染料，其特征在于，所述的R选自R₁、R₂、R₅、R₇、R₈、R₉。

6.权利要求1～5中任一权利要求所述的荧光染料，其特征在于，所述的M选自H，K⁺，Na⁺。

7.权利要求1所述的荧光染料的缀合物。

8.权利要求1所述的荧光染料的制备方法，包括如下步骤：

（1）将荧光素母体化合物II’溶解在50wt%的氢氧化钠的水溶液中，在10～165℃条件下反应10～24h，将得到的粘稠状物加至冰水中，用浓盐酸中和至中性，静置后抽滤得到固体II；

其中，M选自H，K⁺，Na⁺，-R₁₀，-OR₁₀和-(CH₂)_n-O-R₁₀；R₁₀为C_1-18烷基，n为1-18的整数；

R₀选自H、F、Cl、Br和I；

（2）新蒸的环酮III’滴加到0℃的浓硫酸中，然后将步骤（1）获得的固体II：环酮III’按摩尔比1:1～30分批加入到反应体系中后，在10～180℃加热10h～24h后，冷却至常温，倒入冰水中产生沉淀后过滤，得到固体III；

其中，m为0、1、2或3；

（3）N,N’-二甲基甲酰胺和三氯氧磷按摩尔比1:1～30混合，0℃条件下反应20min～2h后，再按照化合物III和三氯氧磷投料摩尔比1:1～30加入化合物III，在10-180℃条件下反应5-60小时，制备化合物IV；

（4）化合物IV与式化合物Rx按投料摩尔比1:1～50，在10-180℃条件下在反应溶剂中反应10-50h，制备化合物I；其中，所述化合物Rx选自i、ii、iii、iv、v、vi、vii和viii；

步骤（4）所述反应溶剂选自二氯甲烷、氯仿、乙醇、甲醇、乙腈、乙酸乙酯、甲苯、二甲苯、邻-二氯苯、浓硫酸或其混合物。

9.一种用于生物样品染色的组合物，包含权利要求1所述的荧光染料或权利要求7所述的荧光染料缀合物。

10.一种生物样品的染色方法，包括将权利要求1所述的荧光染料、权利要求9所述的荧光染料缀合物或权利要求9所述的组合物与生物样品接触的步骤。