[发明专利]一种人参内生多粘类芽孢杆菌生物防治菌剂制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种人参内生多粘类芽孢杆菌生物防治菌剂制备方法，属生物技术领域。 

背景技术

随着环境压力的增大和人们对健康及食品安全要求的提高,微生物农药受到越来越多的重视。目前,用于生防细菌的种类有:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和短小芽孢杆菌(Bacilluspumilis)等。许多生防细菌产生的拮抗物质,抗菌作用是广谱的。多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)中很多菌株作为重要的生防资源，用于多种植物病害的生物防治，美国环境保护署已将其列为可商业上应用的微生物种类之一，我国农业部也将其列为免做安全鉴定的一级菌种。我国许多学者分离到多个多黏类芽孢杆菌生防菌株，分别对黄瓜枯萎病、番茄灰霉病、稻瘟病、荔枝霜疫霉病等具有较好地抑制作用,但现已报道的多黏类芽孢杆菌主要分离自土壤，少数为植物内生菌，本发明采用人参内生多粘类芽孢杆菌菌株是从人参植株中分离获得的，该菌株的发酵液对人参黑斑病菌（Alternaria panax Whetz）、 人参锈腐菌（Cylindrocarpon destructans Zinns）、人参菌核病菌（Sclerotinia schinsengWang）、人参立枯病菌（Rhizoctonia solani Kuhn）、人参根腐病菌（Fusarium solani App）及人参细菌性软腐病（Erwinia carotovora subsp）等病原菌具有明显的防病效果，表现了良好的生防前景，为了进一步较好地开发利用该菌株进行植物病害的生物防治，本发明系统研究了该菌株的发酵条件，旨在为该菌株生物农药和制剂的开发提供依据。 

发明内容

本发明提供一种人参内生多粘类芽孢杆菌生物防治菌剂制备方法，该菌株抑菌谱广、抑菌能力强，用于防治人参、西洋参等植物的病害。该方法可应用在制备防治人参、西洋参等植物病害的菌剂或制剂中。 

本发明所述人参内生多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa），已于2013年2月5日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC 7250。 

本发明所述人参内生多粘类芽孢杆菌制剂的制备方法：将保存的人参内生多粘类芽孢杆菌接入灭菌的PDA斜面培养基，25℃-35℃培养24h-48h，进行人参内生多粘类芽孢杆菌菌种活化。挑取活化的人参内生多粘类芽孢杆菌菌种，接入灭菌的PDB培养基中，120rpm/min,25℃培养24h-48h，培养到OD₆₀₀值为0.5左右，得种子液。将人参内生多粘类芽孢杆菌种子液按体积比2%接种量，接种入灭菌的PDB培养基中，120rpm/min,25℃培养24h-48h，芽胞形成85%以上时，得发酵液。将人参内生多粘类芽孢杆菌发酵液经细菌计数后，调整到10⁸CFU/ml，包装，阴凉避光保存。 

具体实施方式

本发明提供了人参内生多粘类芽孢杆菌制剂的制备方法，本发明领域技术人员可借鉴本发明内容，适当改进工艺参数实现，所有类似的替换和改动对本领域技术人员是显而易见的，都视为本发明。本发明所述人人参内生多粘类芽孢杆菌制剂的制备方法已通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。 

下面结合实施例，进一步阐述本发明。 

实施例1 本发明人参内生多粘类芽孢杆菌生防菌菌剂的制备 

1、菌种：人参内生多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa），已于2013年2月5日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC 7250。

2、人参内生多粘类芽孢杆菌菌种活化