[发明专利]用于重金属铅的快速检测的核酸荧光探针及其检测方法

权利要求书

1.一种用于重金属铅的快速检测的核酸荧光探针，其特征在于，其DNA序列由以下：

A)5'-FAM-GCACTCACTATrAGGAAGA(-Dabcy1)GATG-3'，以及

B)3'-Dabcy1---CGTGAGTGATA(AAGCTGGCCGAGCC)TCTTCTCTAC-5'所组成。

2.一种制备权利要求1所述探针的方法，其特征在于，用DNA/RNA合成仪分别合成设计好荧光标记位置的DNAzyme8-17底物链和酶链，将酶：底物：水=1:1:78的体积比配成的混合液置于PCR仪中95℃退火15min，非变性凝胶电泳分离纯化，切下双链条带，氯化钠溶解后过ZipTipC₁₈微量层析柱回收双链产物，得到双链荧光探针。

3.一种基于权利要求1所述探针的重金属铅快速定性检测方法，通过对比探针中加入其它五种金属离子Zn²⁺、Cd²⁺、Cu²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺在260nm处的荧光强度，得到所述探针对于铅离子的特异性结果，并通过荧光强度变化实现Pb²⁺的定性检测。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述的定性检测是指：在室温下将5.0×10^-7mol/L的探针溶液10μL、超纯无菌水490μL均匀混合，扫描探针的背景荧光强度；随后分别取40μL浓度为5.0×10^-6mol/L的镉、锌、镁、铜、锰、铅6种二价金属盐的溶液滴加到5.0×10^-7mol/L的探针溶液10μL、超纯无菌水450μL均匀混合的探针溶液中，扫描荧光强度；根据探针中加入不同的金属离子以后的荧光强度变化，确定探针对Pb²⁺的特异性，从而实现Pb²⁺的快速定性检测。

5.一种基于权利要求1所述探针的重金属铅快速定量检测方法，通过对探针中加入已知浓度的Pb²⁺，并且在260nm处扫描荧光强度，从而构建出Pb²⁺浓度与荧光强度之间检测体系及其线性关系曲线；随后将待测样品在260nm处扫描出的荧光强度值带入线性关系曲线，从而得到Pb²⁺的浓度并实现定量检测。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征是，所述的探针对不同浓度的特异性的含有不同浓度的Pb²⁺离子的检测体系是指：将荧光探针的初始浓度设计为2.5×10^-7mol/L、1.25×10^-7mol/L两个浓度梯度，Pb²⁺的初始浓度设计为1.0×10^-5mol/L、7.5×10^-6mol/L、5.0×10^-6mol/L、2.5×10^-6mol/L、1.25×10^-6mol/L、1.0×10^-6mol/L、5.0×10^-7mol/L、2.5×10^-7mol/L、1.25×10^-7mol/L、1.0×10^-7mol/L10个浓度梯度，室温下向10μL探针与450μL超纯水混合液中分别滴加40μL各浓度的Pb²⁺溶液。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征是，所述的线性关系曲线是指：以Pb²⁺的μM浓度为横坐标x，260nm处扫描出的荧光强度为纵坐标y，得到1μM以下的曲线为y＝118.11x+57.268；1μM以上的曲线为y=96.68x+82.37。