[发明专利]尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法

权利要求书

1.尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

①用测定旋光并比对的方法确定(S)-NNAL和(R)-NNAL的构型并作为参照，或用Mosher方法确定(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-甲基-d3-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的构型并作为参照；

②配制含有rac-NNAL和氘代rac-NNAL-甲基-d3的混合标准溶液，再进行Mosher衍生化，然后对衍生化以后的混合标准溶液进行HPLC-MS-MS分析;用确定构型后的(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯通过保留时间确定相应的色谱峰保留时间，采用内标法分别建立(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯对其相应内标的标准溶液工作曲线和(R)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯对其相应内标的标准溶液工作曲线；

③将在室温下解冻后的尿液样品摇匀，准确移取10mL于50mL试管中，加入rac-NNAL-甲基-d3溶液，再用MIP-NNAL固相萃取小柱净化，淋洗后洗脱，干燥过滤后进行Mosher衍生化，浓缩至干，再用7/3的乙腈/水溶解后上HPLC-MS-MS检测。

2.根据权利要求1所述的尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法，其特征在于在分析检测尿样中尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL时进行Mosher衍生化,并使用rac-NNAL-甲基-d3作为内标。

3.根据权利要求1所述的尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法，其特征在于使用微波辅助萃取仪在37℃对尿样进行恒温酶解。

4.根据权利要求1所述的尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法，其特征在于向尿液样品加入rac-NNAL-甲基-d3溶液、磷酸二氢氨缓冲溶液（pH6.4,50mM）和β-葡糖苷酸酶混匀后置入恒温振荡器或微波辅助萃取仪中在37℃恒温酶解,再将酶解后的尿样经过MIP-NNAL固相萃取小柱净化，淋洗后用二氯甲烷洗脱，加入无水硫酸钠干燥后过滤，减压浓缩至干，加入三乙基胺无水乙腈溶液、(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酐的无水乙腈溶液，衍生化后再对样品进行HPLC-MS-MS分析，进而换算出尿样中(S)-NNAL和(R)-NNAL的含量。