[发明专利]一种用于转基因水稻PCR检测的重组标准质粒及试剂盒

权利要求书

1.一种用于转基因水稻KF6、TT51、KMD1的定性和定量PCR检测的重组标准质粒，由如下方法获得：将SEQ ID No.1所示的KF6侧翼序列、SEQ ID No.2所示的TT51侧翼序列、SEQ ID No.3所示的KMD1侧翼序列和SEQ ID No.4所示的PLD基因依次连接获得融合片段，再将所得融合片段克隆到载体pMD18-T中，获得所述重组标准质粒，记为pMD-KTK。

2.如权利要求1所述的重组标准质粒，其特征在于所述融合片段核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

3.如权利要求1所述的重组标准质粒在转基因水稻KF6、TT51、KMD1的定性和定量PCR检测中的应用。

4.一种用于转基因水稻KF6、TT51、KMD1的定性PCR检测的试剂盒，主要包括权利要求1所述的重组标准质粒以及特异性引物；所述特异性引物序列如下：

KF6侧翼序列特异性引物：

KF6-F：GATCCCGAAGGCCAACACAATAGG；

KF6-R：TCGTCCGAGGGCAAAGAAATAGAG；

TT51侧翼序列特异性引物：

TT51-F：CCGGCGTCAATACGGGATAAT；

TT51-R：AGCCTCGTTGGATTTCTTACA；

KMD1侧翼序列特异性引物：

KM-F：TGTGGAGCGTCAACTGGGAGC；

KM-R：GCTGTTGCCCGTCTCACTGGT；

PLD基因特异性引物：

PLD-F：AGACCAGAAGACATTGAGCCG；

PLD-R：TAAGGTAATCCCTCGGGTCAG。

5.一种用于转基因水稻KF6、TT51、KMD1的定量PCR检测的试剂盒，主要包括权利要求1所述的重组标准质粒以及特异性引物和探针；所述特异性引物和探针序列如下：

KF6侧翼序列特异性引物和探针：

KF6-F：GATCCCGAAGGCCAACACAATAGG；

KF6-R：TCGTCCGAGGGCAAAGAAATAGAG；

KF6-107P:FAM-ACGACCCGGCCAGTTAAGGCCA-TAMRA；

TT51侧翼序列特异性引物和探针：

TT51-F：CCGGCGTCAATACGGGATAAT；

TT51-R：AGCCTCGTTGGATTTCTTACA；

TT51-120P：FAM-ATCTGCCCCAGCACTCGTCCG-BHQ1；

KMD1侧翼序列特异性引物和探针：

KM-F：TGTGGAGCGTCAACTGGGAGC；

KM-R：GCTGTTGCCCGTCTCACTGGT；

KM-P:FAM-CGTCAATTTGTTTACACCACAATATATCCCG-TAMRA；

PLD基因特异性引物和探针：

PLD-F：AGACCAGAAGACATTGAGCCG；

PLD-R：TAAGGTAATCCCTCGGGTCAG；

TM013:FAM-TGTTGTGCTGCCAATGTGGCCTG-BHQ1。