[发明专利]一种抗草甘膦转基因水稻的制备方法

权利要求书

1.一种抗草甘膦转基因水稻的制备方法，包括以下步骤：

（1）将含草甘膦抗性基因的表达载体转化入农杆菌中；

（2）将步骤（1）的农杆菌菌液侵染水稻的胚性愈伤组织；

（3）将步骤（2）的愈伤组织转移到添加了草甘膦的选择培养基上进行筛选，挑选抗性愈伤组织；

（4）将抗性愈伤组织转入分化培养基分化，将分化形成的再生小苗转入生根培养基中培养，幼苗生根后炼苗、移栽，得到抗草甘膦转基因水稻。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述的表达载体为pZZ00011或pZZ00013。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述pZZ00011载体的构建方法为：合成Epsps-1基因，序列如SEQ ID NO.1所示；将Epsps-1基因与PU130载体分别用BamHI和SacI酶切，将酶切后的Epsps-1基因与PU130载体连接，得到中间载体Pubi-Epsps-1-35spolyA，即pZZ00002；分别用Hind III和PmeI对pZZ00002和P35s-gfp-35spolyA进行双酶切，再将酶切后的二者连接，转化大肠杆菌感受态细胞得到遗传转化载体pZZ00011。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述pZZ00013载体的构建方法为：合成Epsps-2基因，序列如SEQ ID NO.2所示；将Epsps-2基因与PU130载体分别用BamHI和SacI酶切，将酶切后的Epsps-1基因与PU130载体连接，得到中间载体Pubi-Epsps-2-35spolyA，即pZZ00003；分别用Hind III和PmeI对pZZ00003和P35s-gfp-35spolyA进行双酶切，再将酶切后的二者连接，转化大肠杆菌感受态细胞得到遗传转化载体pZZ00013。

5.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述的P35s-gfp-35spolyA是以pCambia1381载体为模板，以SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列为上、下游引物，通过PCR方法扩增得到的。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的选择培养基以N6为基本培养基，并添加2.5mg/L的2,4-D，250mg/L羧苄青霉素和草甘膦。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，选择培养基中草甘膦的终浓度为80~300mg/L。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的农杆菌为EHA105。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的水稻为粳稻。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的粳稻为空育131和/或R187。