[发明专利]一种区分大白菜eIF4E.c两种新单倍型的分子标记及其应用

权利要求书

1.一种区分大白菜eIF4E.c两种单倍型的共显性ASM标记，其特征是，所述标记为与抗性材料中eIF4E.c单倍型Hap^r检测相关的标记命名为ASM-R，片段大小187bp，含有如SEQ ID No.1所示序列；与高感材料中eIF4E.c单倍型Hap^s检测相关的标记命名为ASM-S，片段大小193bp，含有如SEQ ID No.2所示序列。

2.一种扩增区分大白菜eIF4E.c两种单倍型的共显性ASM标记的引物，其特征是，

正向引物Fd1：5'-GGAGGCAAGTTTTGACAATGGCGG-3'；

正向引物Fd2：5'-TGTTCTTTCTTCGTGGGTTAAG-3'

反向引物Rd1：5'-TCAAGCGGTGTAAGCGCTCTTCGC-3′，

反向引物Rd2：5'-CAAAAAGAACATAACTTTCCT-3′。

3.一种区分大白菜eIF4E.c两种单倍型的共显性ASM标记，其特征是，它由权利要求2所述的引物对以大白菜基因组DNA为模板经PCR扩增得到。

4.权利要求1或3所述的共显性ASM标记在大白菜eIF4E.c位点基因型鉴定中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征是，具体为：利用权利要求2所述的ASM标记的引物对待测个体的基因组DNA进行两次PCR扩增，检测扩增片段的大小，如果扩增产物为187bp，则为单倍型Hap^r，如果扩增产物为193bp，即为单倍型Hap^s；如果扩增出上述两条带，则为杂合型。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征是，所述的两次PCR扩增为先利用外侧引物组合Fd1和Rd1扩增He102及06-247基因组DNA，循环20次；再以第一次PCR产物为模板，用内侧引物组合Fd2和Rd2进行第二次PCR扩增；

PCR扩增反应液配制：在20μl反应体系中，包含1×TransStart FastPfu buffer；20ng的基因组DNA；0.4μM正反向引物；0.25mM dNTPmix；1个单位的TransStartFastPfu DNA聚合酶；

PCR循环条件：95℃预变性5分钟；接着是95℃变性30秒，57.5℃退火30秒，72℃延伸1分钟，35-38个循环，最后72℃延伸10分钟。