[发明专利]全人源抗丙型肝炎病毒核心抗原的基因工程Fab抗体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于基因重组抗体药物技术领域，具体而言，涉及全人源基因重组Fab抗体,尤其涉及特异地针对丙型肝炎核心抗原的基因工程Fab抗体及其制备方法和应用。

背景技术

丙型肝炎病毒（Hepatitis Virus C type,HCV）是一种能够引起人类非甲非乙型肝炎的RNA病毒，其主要经血液途径传播，据统计目前全世界约有1.7亿HCV的感染者，我国的丙型肝炎感染者已经超过4000万。目前还没有针对HCV的有效疫苗用以预防丙型肝炎的传播，因此为防止医源性的丙型肝炎的传染，HCV感染的诊断和血液制品生产相关领域的筛查，对于阻止HCV的传播具有重要的意义。

目前，国内外针对丙型肝炎的诊断试剂盒分为两种，一种是检测病人血液或其它样品中存在的HCV病毒基因组，而采用RT-PCR方法进行定量检测；另一种则采用免疫学方法检测样品中的HCV相关的抗原和或抗体。针对抗HCV病毒相关的抗体类试剂盒在检测HCV感染的“窗口期”约70-80天；而针对HCV核心抗原的，用抗HCV核心抗原的单抗的双抗体夹心法检测样品中存在的HCV核心抗原，使检测HCV感染的“窗口期”提高至14天，但两种试剂盒均各有优缺点。

单克隆抗体技术、基因重组抗体技术已经是比较成熟的技术，并且通过杂交瘤技术已经制备了多种针对HCV的单克隆抗体。也有采用噬菌体展示技术，构建了针对HCV的抗体库。我们通过噬菌体技术从HCV感染者中分离外周血单个核细胞，建立了相应的抗HCV抗体展示库，并从该库中筛选到能够与HCV核心抗原具有高亲和力的噬菌体颗粒，并通过基因克隆技术获得相应的抗体基因，采用全人源抗体基因工程表达技术，在大肠杆菌中实现全人源Fab抗体的表达。利用本方法制备的Fab抗体可能作为HCV诊断试剂盒的组分用于诊断试剂盒的开发，并且该Fab抗体可能具有治疗HCV的潜在价值。

发明内容

本发明通过基因重组技术，克隆抗HCV核心抗原的抗体基因，表达并分离纯化全人源抗HCV核心抗原的基因工程Fab抗体，并将该抗体用于研制HCV诊断试剂盒，尤其是用于早期复查HCV感染的HCV核心抗原的检测。因此，本发明的目的在于提供一种全人源抗丙型肝炎病毒核心抗原的基因工程Fab抗体及其制备方法和应用、编码该Fab抗体的DNA分子、包含该DNA分子的表达载体，以及被该表达载体转化的原核宿主细胞。

本发明的目的是这样实现的：

一种全人源抗丙型肝炎病毒核心抗原的基因工程Fab抗体，包含重链可变区和轻链可变区，其中：（1）重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体；（2）轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体。

一种DNA分子，编码上述的基因工程Fab抗体的重链或/和轻链。

在本发明的一个较佳的实施例中，上述的DNA分子编码所述基因工程Fab抗体的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示，以及编码所述基因工程Fab抗体的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8所示。

一种表达载体，包含有上述的DNA分子以及与该DNA分子操作性相连的表达调控序列。

一种原核宿主细胞，它被上述的表达载体转化。优选地，所述的原核宿主细胞是大肠杆菌。进一步优选地，所述的原核宿主细胞是大肠杆菌BL21。

上述的基因工程Fab抗体可以用于制备诊断、预防和/或治疗丙型肝炎病的试剂或药物。

一种制备上述的基因工程Fab抗体的方法，包括如下步骤：

（1）提供一表达载体，该表达载体含有权利要求2所述的DNA分子以及与该DNA分子操作性相连的表达调控序列；

（2）用步骤（1）所述的表达载体转化原核宿主细胞；

（3）在适合所述的基因工程Fab抗体表达的条件下培养步骤（2）所得的原核宿主细胞；

（4）分离纯化获得所述的基因工程Fab抗体。

上述的制备方法，其中所述的表达载体为分泌型表达载体，该分泌型表达载体能在分泌信号引导下使所述基因工程Fab抗体的多肽链被分泌到原核宿主细胞周质中。

与现有技术相比，本发明涉及的基因工程Fab抗体及其制备方法具有如下优点和显著的进步：