[发明专利]一种含有重组腺病毒的制剂

说明书

技术领域

本发明涉及重组腺病毒，尤其涉及一种含有重组腺病毒的制剂。

背景技术

根据国家食品药品监督管理局发布的《关于发布化学药品注射剂和多组分生化药注射剂基本技术要求的通知》（国食药监注【2008】7号）中规定辅料选用的基本原则：在满足需要的前提下，注射剂所用辅料的种类及用量应尽可能少。重组腺病毒作为临床药物，在能维持其稳定性的前提下，原则上要求制剂辅料种类和用量越少越好。

已报道的现有技术中，美国专利US2006/0205080A1公开了一种包含Tris-HCl、MgCl₂、甘氨酸和选自丙二醇、DMSO、PEG、蔗糖、甘油、四氢呋喃、乙二醇醚的含水共溶剂的组合物，该制剂可在2～8℃较好地保持腺病毒的活性，但该组合物中的组分较多，导致产品生产较为复杂，甚至加大基因治疗药物的安全性风险。

此外，中国专利CN101163794A公开了一种腺病毒组合物，该组合物包含腺病毒颗粒及能维持pH在8.0-9.6的缓冲液和甘油，具有组分简单的优点，但其在2～8℃条件下长期保存腺病毒的稳定性不理想。

发明内容

本发明的目的在于提供一种含有重组腺病毒的制剂，该制剂由包括重组腺病毒、缓冲液或缓冲体系、阻止腺病毒发生物理或化学变化而失活的保护剂组成，所述的缓冲液或缓冲体系选自Tris-HCl缓冲液、磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液、精氨酸-盐酸的任一种或其组合；适合于本发明的保护剂选自丙二醇、聚乙二醇400或二甲基亚砜的任一种或其组合。

进一步，所述的缓冲液或缓冲体系的pH为7.4-8.6。

进一步，所述的缓冲液或缓冲体系为精氨酸-盐酸缓冲液。

进一步，所述的缓冲液或缓冲体系为Tris-HCl缓冲液。

进一步，所述的缓冲液或缓冲体系为磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液。

进一步，所述的多羟基化合物为丙二醇，进一步，本发明制剂中丙二醇的浓度为5-20w/v%，优选为10-20w/v％。

本发明可根据稳定维持腺病毒活性的需要，调整和选择所需的缓冲液浓度。本发明制剂中缓冲液的浓度为10-100mM，所述缓冲液选自Tris-HCl缓冲液、磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液、精氨酸-盐酸的任一种。这样的选择可以取得令人满意的保存结果。

本发明的制剂由重组腺病毒、10-50mM缓冲液和10%丙二醇的组成，pH为7.8；所述的缓冲液选自Tris-HCl缓冲液、磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液、精氨酸-盐酸的任一种。

本发明的磷酸氢二钠–柠檬酸和精氨酸-盐酸缓冲液不仅具有很好的缓冲作用，还对腺病毒具有一定程度的保护作用。

本发明的制剂具有组分简单，不含有二价阳离子盐和非离子表面活性剂，如MgCl₂和吐温-80等，也能在2～8℃甚至室温很好保存腺病毒，并使其具有良好的稳定性等突出优点。

本发明制剂主要应用于保存基因治疗的重组腺病毒，还可应用于保存任何野生型腺病毒或其他用途的重组腺病毒。具体地说，包括所有利用重组DNA技术构建的复制缺陷型腺病毒或增殖型腺病毒，以及所有的人或动物的野生型腺病毒或其突变腺病毒。

采用国际通用的TCID50法检定的病毒滴度值和紫外法检定的病毒颗粒数之比值（即比活度）来评价本发明的重组腺病毒的稳定性。

本发明采用TCID50方法测定重组腺病毒滴度，其原理是：将经过系列稀释的病毒样品感染293细胞，将每个稀释度所感染一定数量的细胞孔培养10天，在显微镜下观察各细胞孔中的细胞状况，统计病变细胞孔，利用TCID50计算公式，计算病毒滴度。

TCID50/ml=10^{-[-L-d(s-0.5)]+b}

其中，L：为最低稀释度的对数；d：为稀释对数之间的差；s：为病变阳性孔比率之和；b：为病毒接种量，换算为每毫升体积的倍数的对数。