[发明专利]嵌合抗原受体及其用途

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤生物制药领域，具体涉及一种嵌合抗原受体LMP1-scFv-CH2CH3-CD28-CD134-CD3ζ的制备及其用途。

背景技术

嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）是由抗原特异性的受体（如单链抗体scFv），间隔序列（spacer），跨膜序列（TM Domain）和胞内共刺激信号分子组成。间隔序列可以是hIgG1、hIgG4、hIgD、CD7或CD8等，跨膜序列可以是CD3ζ、CD4、CD7、CD8、FcεRIγ、H2-Kb等。胞内共刺激信号分子可以是CD28、CD134、CD137、CD244、FcεRIγ、CD3ζ等。根据胞内共刺激信号分子的组成的差异，CAR被分为三代。第一代CAR仅含有一个胞内的信号分子（FcεRIγ或CD3ζ）。通过对CAR分子胞内区的信号分子的改变，显著提高了CAR修饰的的T淋巴细胞在体内对肿瘤细胞的杀伤力及在增强了在体内抗原刺激下的增殖能力及延长了存活周期。根据共刺激信号分子的数量将CAR又分为第二代（含有两个共刺激信号分子）和第三代（含有三个共刺激信号分子）。CAR修饰的T淋巴细胞在体内能够通过其单链抗体特异的识别相关肿瘤表面抗原，然后通过胞内共刺激信号分子将识别的信号传递到细胞内，激活T淋巴细胞的杀伤性，杀伤肿瘤细胞。

CAR修饰的T细胞（CART）用于治疗相关肿瘤，通过对患者的T淋巴细胞的改造，使T淋巴细胞能够通过其表达的CAR分子识别肿瘤相关抗原，从而激活，释放各种细胞因子，杀伤肿瘤细胞。因此这种改造的T淋巴细胞具有很好的靶向性，对肿瘤抗原的识别不受主要组织相容性复合体（MHC）的限制。另外在治疗过程中是对患者自身的T细胞进行改造，并且改造的T细胞表达的scFv也是人的，所以避免患者自身对CART细胞的排斥，保证CART细胞回输到患者体内后的活性。

目前的过继细胞免疫治疗主要有CIK细胞，DC-CIK细胞等，但是CIK细胞由于没有特异性的肿瘤杀伤作用，故在临床上的疗效有限，而DC-CIK虽然对肿瘤有特异性杀伤，但是DC细胞的制备成本较高，并且从外周血能够分离的DC细胞的数量也有限，并且用于刺激DC细胞的特异抗原制备较困难，而目前使用较多的是肿瘤细胞的裂解物，大大降低了DC-CIK细胞的特异性，故在临床上DC-CIK的疗效不显著。

LMP1是EB病毒表达潜在膜蛋白，是EB病毒表达的唯一确定具有转化能力的蛋白，可使大鼠成纤维细胞发生转化，使其能够不依赖于生长。本实验通过LMP1胞外区制备的抗原筛选天然人Fab噬菌体库，获得的抗LMP1的Fab与鼻咽癌细胞表面的LMP1有很好的亲和力，并且在0.5μM浓度时对肿瘤细胞的生长抑制大于率50%。本发明以该Fab序列设计合成的抗LMP1的scFv。

发明内容

本发明的目的是为解决目前T细胞治疗过程中，抗原呈递细胞制备困难，且成本较高，制备周期较长，重复性差等问题。

为了解决上述问题，本发明提供一种嵌合抗原受体，该嵌合抗原受体由人抗EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）的单链抗体（scFv），人IgG1分子Fc区的CH2CH3及T细胞共刺激信号分子CD28、CD134（OX40）及CD3ζ的胞内信号结构串联构成；其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1 所示；其编码的基因序列如序列表中的SEQ ID NO.3所示。

该嵌合抗原受体针对的人抗EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)的单链抗体，其氨基酸序列如序列表中的SEQ ID NO.4 所示。其编码的基因序列如序列表中的SEQ ID NO.5所示。

该嵌合抗原受体的氨基末端含有一个信号肽，其氨基酸序列如序列表中的SEQ ID NO.6 所示。

该嵌合抗原受体的单链抗体的重链和轻链分子之间有个(gly4ser)3连接肽，(gly4ser)3连接肽即Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser。

该嵌合抗原受体以IgG1分子的CH2CH3及CD28、CD134、CD3ζ的胞内信号结构域串联而成的结构域为T细胞共刺激信号传导结构，其氨基酸序列如序列表中的SEQ ID NO.9所示。

该嵌合抗原受体中的T细胞共刺激信号分子除了是CD28-CD134-CD3ζ还可以是CD28-CD3ζ，CD28-CD137(4-1BB)-CD3ζ。

所述的嵌合抗原受体LMP1-scFv-CH2CH3-CD28-CD134-CD3ζ在制备EB病毒相关肿瘤药物中的应用。