[发明专利]一种黄曲霉毒素B1的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于电化学检测领域，特别涉及一种黄曲霉毒素B₁的检测方法。

背景技术

黄曲霉毒素主要是由黄曲霉菌和寄生曲霉菌等多种真菌产生的毒性代谢产物，其结构中含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮。黄曲霉毒素是迄今发现的毒性最强的一类生物毒素，具有很强的毒性、致癌性、致突变性和致畸性。目前已分离的黄曲霉毒素及其衍生物已有20多种，其中黄曲霉毒素B₁（AFB₁）的毒性、致癌性、污染率最大，并且是各种真菌毒素中其化学性质最稳定的一种，一般的食品加工手段对其产生的破坏性极小，广泛存在于粮食谷物和加工食品中，对人类健康危害性极大。大量研究资料表明:粮食、食用油（花生油、菜籽油、大豆油、玉米油）、特种油,如橄榄油、山茶油等油料作物的种子和加工品、水果、干果、蔬菜、调味品、烟草和草药、乳制品和发酵类产品中都发现了黄曲霉毒素B₁的存在。

各国都规定了各种真菌毒素的限量标准并加强监管力度。欧盟规定在玉米、花生、坚果和谷物等食品中黄曲霉毒素总量不能超过4ppb，其中黄曲霉毒素B₁不能超过2ppb；我国食品中黄曲霉毒素B₁允许量植物油（除玉米、花生油）中不得超过10μg/kg，其他粮食、豆类、发酵食品及婴幼儿配方食品中不得超过5μg/kg。尽管世界各国对食品中黄曲霉毒素限量标准不尽相同，但都趋于更低的控制线。目前检测黄曲霉毒素的常用技术为HPLC，ELISA，TLC等，但这些检测技术都在不同程度上存在着样品前处理复杂、仪器设备昂贵、耗时较长、操作流程复杂等不足。而电化学交流阻抗技术作为一种快速灵敏的电化学检测方法因其能实现很宽频率范围内的阻抗谱来研究电极系统,并且作为一种无损伤、原位电极过程的电化学测试技术，普遍应用于电极界面特性的研究。碳纳米管因有很好的导电性、高的比表面积和热力学稳定性等特点，应用广泛；离子液体是完全由阴离子与阳离子组成的液体，在室温或室温附近温度下呈液态的由离子构成的物质。

发明内容

本发明的目的是提供一种黄曲霉毒素B₁（AFB₁）的检测方法，该方法选择性好、响应速度快、灵敏度高、检测范围宽。

发明的目的可以通过以下方案来实现：

一种黄曲霉毒素B₁的检测方法，其步骤包括：

（1）绘制标准曲线：将黄曲霉毒素B1样品与有机溶剂共孵育，配置成不同浓度的黄曲霉毒素B₁标准品，在标准品中分别加入阻抗溶液；用多壁碳纳米管/离子液体/抗体修饰电极测得阻抗溶液中不同黄曲霉毒素B₁浓度的相应的阻抗值，再以阻抗差值为纵坐标，黄曲霉毒素B₁标准样浓度为横坐标，绘制标准曲线；

（2）将待测样品提纯后与有机溶剂共孵育，配成待测样品溶液，然后再加入阻抗溶液，用预处理过的多壁碳纳米管/离子液体/抗体修饰电极测得溶液中的阻抗值，再根据步骤（1）中所得的标准曲线，计算待测样品中黄曲霉毒素B₁的浓度。

校准曲线上通过线性方程式为Ret=1651.9C+600.56

式中：Ret--阻抗差值（ohm）

C--黄曲霉毒素浓度（ng/ml）

所述步骤（1）和步骤（2）中的阻抗溶液为磷酸盐缓冲溶液，该溶液的pH值为6.8-8.0，浓度为0.5-1.5mmol/L；所述磷酸盐缓冲溶液中还含有浓度为0.5-1.5mmol/L的K₄Fe(CN)₆或K₃Fe(CN)₆和0.05-0.15mol/L的KCl。优选的，所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.0-7.8，浓度为0.8-1.2mmol/L，所述磷酸盐缓冲溶液中还含有浓度为0.8-1.2mmol/L的K₄Fe(CN)₆或K₃Fe(CN)₆和0.08-1.12mol/L的KCl。更优选的，所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.4，浓度为1mmol/L，所述磷酸盐缓冲溶液中还含有浓度为1mmol/L的K₄Fe(CN)₆或K₃Fe(CN)₆和0.1mol/L的KCl。