[发明专利]从连翘叶中复合提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种属于连翘叶分离技术领域，特别是一种从天然植物连翘叶中连续提取有效成分连翘酯苷A、连翘苷和芦丁的方法。

背景技术

连翘为木犀科连翘属落叶灌木，是常用药材，传统以果实入药，但民间调查显示，连翘叶有消除便秘，预防感冒，降血脂，降血压等作用。国内己有研究者对连翘叶的化学成分进行了初步分析，并利用连翘叶制成茶叶作为滋补调理饮料应用。连翘叶常作为保健茶使用，化学研究证明，连翘叶与常用药材连翘果实的化学成分有较好一致性，主要含有木质素类、苯丙素苷类、三萜酸类、黄酮类和挥发油类等，并且叶子中的有效生物活性成分如连翘苷、连翘酯苷的含量远高于连翘果实。

连翘苷和连翘酯苷A是国家药典2010年版规定的连翘质量控制指标成分。连翘苷有较好的抗菌、降血脂和减肥作用；连翘酯苷有较好的抗病毒和抗氧化作用，对金黄色葡萄球菌等多种致病菌具有抑制作用，还能抑制磷酸二酯酶、真菌以及活性氧；芦丁具有抗炎、抗病毒、抗氧化、降低毛细血管脆性和通透性等作用。三者在医药和食品领域作为天然药物、天然防腐剂、天然抗氧化剂均具有很广泛的应用前景。

目前各种文献资料中，从连翘果实或连翘叶中只单独提取一种活性成分或者两种，没有合理利用连翘资源，造成资源的严重浪费。如中国专利200610148179.0，200810176773.X，201010235729.9等都是针对一种活性成分进行工艺研究，中国专利201110209731.3公开了一种从连翘叶提取连翘苷和连翘酯苷A的方法，其先通过热水提取，沉淀分离，再用有机溶剂萃取，乙醇重结晶等制备连翘苷和连翘酯苷A，但耗时太长，得率比较低，而且大量芦丁被丢弃。现有技术采用的方法直接水提或水提后有机溶剂萃取，或碱水提取，或酸水提取，没有综合考虑其他活性物质的活性，而且操作复杂，成本较高。目前尚未见到从连翘叶中同时提取分离连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的相关报道。

发明内容

为了解决现有技术中提取分离连翘苷、连翘酯苷A所存在的技术问题，本发明提供了一种方法简单，原料利用率高、可从连翘叶中连续提取分离出连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法。

解决上述技术问题所采用的技术方案是由以下步骤组成：

（1）提取

将连翘叶粉碎至40～60目，60～75℃用体积浓度为55%的乙醇浸提40～60分钟，每1g连翘叶对应添加15～40mL的乙醇，优选20～30mL，提取2～3次，合并浸提液，静置，过滤，50～60℃减压浓缩回收乙醇，按照每100mL浓缩液中添加3～6mL的量向浓缩液中添加无水乙醇，优选4～5mL，室温静置，过滤，得到连翘叶提取液；

（2）树脂分离

将连翘叶提取液用大孔吸附树脂吸附，连翘叶与大孔吸附树脂的质量比为1：1.6～2，优选1：1.8，水洗杂质，用体积浓度为30%的乙醇洗脱，洗脱流速为1～3BV/h，洗脱体积为5～8BV，得到馏分Ⅰ，用浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱流速为1～3BV/h，洗脱体积为5～8BV，得到馏分Ⅱ；

（3）沉淀分离

将馏分Ⅰ减压浓缩回收乙醇，室温静置至沉淀物与水分离，得到沉淀物为芦丁粗品，水层为连翘酯苷A粗提液，用水饱和的正丁醇萃取1～3次，回收正丁醇，余液干燥，得到连翘酯苷A粗品；将馏分Ⅱ减压浓缩回收乙醇，室温静置，分离沉淀，得到连翘苷粗品；

（4）纯化

将步骤（3）中所得的连翘苷粗品和芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶2～4次，干燥，分别得到连翘苷和芦丁；将连翘酯苷A粗品用体积浓度为30%的甲醇溶解，用C18反相硅胶柱层析分离，体积浓度为30%的甲醇平衡，体积浓度为40%的甲醇洗脱，35～40℃减压浓缩回收甲醇，余液冷冻干燥，得连翘酯苷A。

上述大孔吸附树脂的型号是AB-8或D101。

上述步骤（4）中将连翘苷粗品和芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶2～4次，干燥，分别得到连翘苷和芦丁；将连翘酯苷A粗品用体积浓度为30%的甲醇溶解，用C18反相硅胶柱层析分离，3倍柱床体积的浓度为30%的甲醇平衡，体积浓度为40%的甲醇洗脱，35～40℃减压浓缩回收甲醇，冷冻干燥，得连翘酯苷A。