[发明专利]高效液相色谱法检测乌头类生物碱用的供试品溶液的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱法检测乌头类生物碱用的供试品溶液的制备方法。

背景技术

    附子、川乌等乌头属药用植物为常用中药材，广泛用于临床治疗中，《全国医药产品大全》收载有含川乌、附子、草乌、短柄乌头、高乌头、黄花乌头的中成药超过350种。乌头属药用植物中主要毒/效成分为双酯型生物碱（乌头碱、新乌头碱、次乌头碱等）、单酯型生物碱（苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱等）和醇胺型生物碱（乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱等），因此，乌头属药材、饮片及其制剂一般要求检测乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱，如国家法定标准《中国药典》2010年版（一部）在附子、川乌、草乌质量标准项下规定了高效液相色谱法检测上述6个酯型生物碱的方法和含量限度标准。

高效液色谱法（HPLC）是一种常用的分析方法，在药物质量控制中使用最多、高效、简便。高效液色谱法检测乌头属药材及其炮制加工品（饮片）中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱的方法已有大量的文献报道，但检测相应的中成药或复方药物/制剂报道很少，主要是因为中成药或复方药物/制剂中的生物碱成分含量通常较低，但混合的成分众多、干扰大，因此，限制了高效液色谱法在检测中成药中乌头类生物碱的应用。

中国药典（2010版）（一部）采用HPLC法检测川乌、附子中乌头类生物碱，其供试品溶液的制备方法为：被检品原料，加氨试液、异丙醇-乙酸乙酯（1:1）提取，减压回收除去溶剂，加异丙醇-乙酸乙酯（1:1）等溶媒溶解作为供试品溶液。研究发现，该方法对含有乌头类生物碱成分的被检品的实际测定结果，往往比其真实含量明显偏低，检测结果的准确性不能令人满意，并会导致对相关药物的质量控制、使用和治疗效果的不利影响。

发明内容

    针对上述问题，本发明提供了一种高效液相色谱法检测乌头类生物碱用的供试品溶液的制备方法，不仅操作简单方便，而且可以使乌头类生物碱的实际检测结果更接近其真实含量。

    本发明高效液相色谱法检测乌头类生物碱用的供试品溶液的制备方法，同样是由含有待检乌头类生物碱成分的被检品提取物，经药典允许的溶媒溶解后得到。所说该被检品的提取物，是将被检品的含有乌头类生物碱成分且pH≤5的酸性水提取液，用大孔吸附树脂吸附（例如可采用常规的大孔树脂柱方式）后，先用水洗和/或依次用pH值8~10的碱水及水洗除杂质，即：可以先仅用中性水洗涤，或是依次用所说的碱水和中性水洗涤，还可以采用中性水-碱水-中性水依次洗涤后，再用醇体积含量50~100%且pH≤4的酸性醇-水溶液洗脱并收集洗脱液，除去溶剂后，即得到所说的被检品提取物。其中，所说醇-水溶液中的醇为乙醇或甲醇。

所说的乌头类生物碱成分，至少包括乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱中的一种。

经大孔吸附树脂吸附后的洗涤除杂质，特别优选的是先用pH值8~10的碱性水洗涤，然后用中性水洗涤。实验表明，大孔吸附树脂吸附后先用pH 8~10的碱水洗涤，能更好的除去杂质，再用水洗至近中性后，再进行所说的用酸性醇-水溶液洗脱，从而能更好地分离纯化乌头类生物碱成分。其中，所说的pH值8～10的碱水，可优选最为常用和易得的氢氧化钠、碳酸钠或碳酸氢钠等水溶液，也可以使用包括pH值8～10的氨水溶液等其它碱性成分的水溶液。

上述的制备方法中，所说的被检品的含有乌头类生物碱成分的酸性水提取液，可以为被检品原料的酸水超声波提取液，例如由对含有乌头类生物碱成分的药材原料，或是中成药或其复方制剂原料的酸水超声波提取液；也可以是被检品原料提取物的酸性水溶液，例如将已由目前其它报道和/或使用的其它方法对含有乌头类生物碱成分的被检品原料提取得到的提取物经酸性水溶解后所得到的酸性水溶液。特别是由不同的有机溶剂对被检品原料提取并除去溶剂后的提取物配制的pH≤5的酸水溶液。例如采用pH≤5的含30-80%的甲醇或乙醇或丙酮-水溶液提取、回收溶剂得到的提取物；或采用2010版中国药典川乌、附子项下所述的加氨试液、异丙醇-乙酸乙酯（1:1），超声处理，回收溶剂得到的提取物等。