[发明专利]培养基及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地涉及培养基及其应用，更具体地，本发明涉及培养基、制备上皮样细胞的方法、用于制备成釉细胞的试剂盒以及制备成釉细胞的方法。

背景技术

目前，将干细胞诱导为特异性的组织细胞类型，并用于相应组织病变的治疗，是现阶段众多疾病治疗的新途径。近年来，再生医学及组织工程学领域的研究者，主要以干细胞作为种子细胞，诱导制备特异性的组织细胞类型，从而为临床上细胞、组织或器官的移植治疗提供大量的材料，进而用于糖尿病、帕金森氏病、脊髓损伤、白血病、心肌损伤、肾衰竭、肝硬化等疾病的治疗，并且，目前已取得较大进展。

然而，目前口腔再生医学中牙齿再生的重要牙源性细胞尤其是成釉细胞的制备方法仍有待改进。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种制备成釉细胞的方法，以及所需的试剂盒。

根据本发明的一个方面，本发明首先提出了一种培养基。根据本发明的实施例，该培养基为添加有N2supplement、维甲酸和BMP-4的DMEM/F12培养基。发明人惊奇地发现，利用本发明的培养基能够有效地将干细胞诱导为上皮样细胞，进而，将获得的上皮样细胞与动物牙胚的间充质重组、培养及移植后，其能够有效地衍生为牙样结构中具有分泌釉质能力的成釉细胞，进而能够有效地用于牙齿再生，从而为相关口腔疾病例如牙齿缺损相关疾病的治疗提供了新思路。

根据本发明的另一方面，本发明还提出了一种制备上皮样细胞的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：利用前述的培养基培养干细胞，以便使该干细胞分化为上皮样细胞，其中，该干细胞为选自胚胎干细胞和诱导多能干细胞的至少之一。根据本发明的实施例，利用本发明的制备上皮样细胞的方法，能够有效地制备获得上皮样细胞，并且获得的上皮样细胞能够有效地与动物牙胚的间充质重组，进而经培养及移植后，能够有效地获得牙样结构中具有分泌釉质能力的成釉细胞。

根据本发明又一方面，本发明还提供了一种用于制备成釉细胞的试剂盒。根据本发明的实施例，该试剂盒包括：第一培养基，该第一培养基为前面所述的培养基；和第二培养基，该第二培养基为添加有FBS、谷氨酰胺、非必需氨基酸和青链霉素的高糖DMEM培养基,其中，该第一培养基和第二培养基设置在不同的容器中。根据本发明的实施例，本发明的试剂盒能够有效地用于牙样结构中具有分泌釉质能力的成釉细胞的制备。

根据本发明的再一方面，本发明还提供了一种制备成釉细胞的方法。根据本发明的实施例，该方法包括以下步骤：根据前述的制备上皮样细胞的方法，制备上皮样细胞；将该上皮样细胞与第一动物牙胚的间充质进行重组，并对所得到的重组产物进行培养，以便得到重组组织；将该重组组织植入第二动物体内并维持预定时间，以便获得成釉细胞。发明人惊奇地发现，利用本发明的制备成釉细胞的方法，能够有效地制备获得牙样结构中具有分泌釉质能力的成釉细胞，进而能够有效地用于牙齿再生，从而为相关口腔疾病的治疗提供了新思路。

在本发明的又一方面，本发明还提出了干细胞在制备成釉细胞中的用途。另外，发明人发现所得到的包含成釉细胞的产品具有牙状结构。因而，本发明还提出干细胞在制备牙状结构中的用途。根据本发明的实施例，该牙状结构或者成釉细胞是在哺乳动物中进行移植干细胞的培养物或者衍生物而实现的。根据本发明的实施例，可以采用的哺乳动物包括但不限于小鼠、大鼠、猪、狗和猴。根据本发明的实施例，首先将干细胞诱导形成上皮细胞状细胞，再进行移植。根据本发明的实施例，可以采用的干细胞可以为胚胎干细胞，也可以为诱导多能干细胞。根据本发明的实施例，所采用的诱导多能干细胞是从尿液细胞、皮肤成纤维细胞和牙周膜干细胞的至少一种获得的。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1显示了根据本发明一个实施例的制备成釉细胞的方法的流程示意图；

图2显示了根据本发明的一个实施例，制备上皮样细胞时，干细胞向上皮样细胞诱导分化过程中各阶段的形态结构及免疫荧光检测结果；

图3显示了根据本发明的一个实施例，制备成釉细胞时，将上皮样细胞与鼠源牙胚间充质的重组组织移植于裸鼠肾包膜下后的观察及检测结果；