[发明专利]抗风湿类药物来氟米特(Leflunomide)抑制神经母细胞瘤生长

说明书

技术领域：

本发明涉及抗风湿类药物来氟米特具有抑制神经母细胞瘤生长的功能，其机理主要是通过阻断细胞周期以及促进细胞凋亡，来达到抑制神经母细胞的生长。进一步通过神经母细胞瘤小鼠模型体内实验证实来氟米特可以抑制神经母细胞瘤的生长，这表明来氟米特可以作为一种潜在的抗神经母细胞瘤药物用于临床研究和开发。

背景技术

神经母细胞瘤是一种儿童常见的交感神经系统恶性肿瘤，该病多发于10岁以下儿童，占儿童肿瘤发生率的10％及儿童肿瘤死亡率的15％。神经母细胞瘤是从发育中的脊髓外层迁移过来的神经母细胞或原始神经嵴细胞所衍化的，其治疗效果与诊断时患儿的年龄及临床分期有关，患儿年龄越大，分期越高，肿瘤越容易扩散，则预后越差。尽管对该肿瘤的治疗方法研究从未间断，也取得了一些研究进展，但是疗效甚微。因此探讨发现新神经母细胞瘤的治疗手段具有重要的临床意义。

来氟米特(leflunomide)，商品名爱若华，是一种合成的异恶唑类化合物，具有免疫抑制及抗增殖作用。美国食品及药物管理局(FDA)于1998年批准用于治疗类风湿性关节炎(RA)，1999年中国药品食品监督管理局(SFDA)批准在中国上市。与其他免疫抑制剂相比，来氟米特(leflunomide)具有抑制嘧啶合成、抑制蛋白酪氨酸激酶活性等的特点，并具有抗病毒作用等优点。主要用于自身免疫性疾病如类风湿性关节炎的治疗以及系统性红斑狼疮(SLE)等，且药物副作用较其他抗风湿药小。

来氟米特作为临床用药，其毒副作用清楚。在我们的研究中，开发了来氟米特药物的老药新用的用途。我们首次发现来氟米特具有抑制神经母细胞瘤生长的新功能，主要通过阻断细胞周期以及促进细胞凋亡，来达到抑制神经母细胞的生长。进一步通过神经母细胞瘤小鼠模型体内实验证实来氟米特可以抑制神经母细胞瘤的生长，这表明来氟米特可以作为一种潜在的抗神经母细胞瘤药物用于临床研究和开发。

发明内容

本发明的目的在于，实验表明用于治疗类风湿性关节炎(RA)的来氟米特具有抑制神经母细胞瘤生长的功能，其机理是通过阻断细胞周期以及促进细胞凋亡，来达到抑制神经母细胞的生长。基于此来氟米特可以作为一种抗神经母细胞瘤药物用于临床研究和开发。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

采用神经母细胞瘤细胞系BE2-C，SK-N-F1，SK-N-DZ为研究对象，研究抗风湿类药物来氟米特在制备抗神经母细胞瘤药物中的应用。

发明人通过实验发现：

1.来氟米特能抑制细胞的生长。

2.来氟米特可以阻断神经母细胞瘤细胞的周期。

3.来氟米特可以加速神经母细胞瘤的凋亡。

4.来氟米特在神经母细胞瘤的荷瘤鼠模型上具有抑制肿瘤生长的功能。

附图说明：

图1为来氟米特能够抑制神经母细胞瘤细胞BE2-C，SK-N-F1，SK-N-DZ的生长；A.100μM的来氟米特处理不同的神经母细胞瘤细胞BE2-C，SK-N-F1，SK-N-DZ细胞3天，细胞数量明显减少；B.CCK-8实验测定细胞的生长曲线显示不同浓度的来氟米特对三种神经母细胞瘤细胞系的生长抑制作用随浓度的增加，抑制程度增强；C.统计分析Brdu细胞增殖检测100μM的来氟米特处理3天对三种神经母细胞瘤的增殖抑制作用(*表示与对照组比较P＜0.05，**表示P＜0.01)。

图2为来氟米特能够阻断神经母细胞瘤细胞BE2-C，SK-N-F1，SK-N-DZ的细胞周期；A.100μM的来氟米特处理不同的神经母细胞瘤细胞BE2-C，SK-N-F1，SK-N-DZ细胞3天，流式细胞术检测细胞周期图谱；B.流式细胞术检测细胞周期图谱结果统计分析显示100μM的来氟米特处理3天对神经母细胞瘤细胞S期有阻滞作用(*表示与对照组比较P＜0.05，**表示P＜0.01)。

图3为来氟米特可以加速神经母细胞瘤BE2-C，SK-N-F1，SK-N-DZ细胞的凋亡；A.100μM的来氟米特处理不同的神经母细胞瘤细胞BE2-C，SK-N-F1，SK-N-DZ细胞3天，流式细胞技术分析Annexin-V/FITC标记细胞凋亡图谱；B.流式细胞术检测细胞凋亡图谱统计分析显示100μM的来氟米特处理3天，可以明显加速细胞凋亡(*表示与对照组比较P＜0.05，**表示P＜0.01)。

图4为来氟米特在神经母细胞瘤的荷瘤鼠模型上具有抑制肿瘤生长的功能；A.肿瘤形态大小展示；B.肿瘤体积生长曲线；C.肿瘤重量结果。

具体实施方式