[发明专利]一种烟草中2,4-D残留量的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于农药残留检验技术领域，具体涉及烟草中2，4-D残留量的测定方法。 

背景技术

2，4-D是第一类投入商业生产的选择性除草剂，广泛施用于禾谷类作物田、针叶树林和牧草场等。2，4-D都为低毒除草剂，通过植物叶面、茎杆和根系吸收传导，阻碍植物激素的正常传导，从而使其死亡。但在使用过程中，结果表明此类物质可以引起人类软组织恶性肿瘤，对动物体表现出胎盘毒性。CORESTA的农用化学品咨询委员会(ACAC)在2008年制定的118种农用化学品指导性残留限量表中将2，4-D的限量定为0.20mg/kg。 

对于水、土壤、蔬果以及纺织品中2，4-D残留的检测已有相关报道，而对于烟草中有机氯除草剂农药残留的检测报道较少。V.等利用在线的液相色谱-气相色谱联用法测定了烟草中的2，4-D，酯化后的烟草样品进入液相色谱分离，选取合适的保留时间段切入气相色谱再次分离，然后通过电子捕获检测器检测。刘惠民等研究开发了非水相毛细管电泳法同时测定烟草中的麦草畏、2，4-D和2，4，5-T残留，三种化合物的检出限范围为0.6μg/mL，烟草样品经乙酸乙酯超声萃取，凝胶渗透色谱净化后，进入毛细管电泳仪检测分析。宋娟梅等改进报道的毛细管电泳法，采用正交法设计实验，优化毛细管电泳法，并将优化好的方法应用于烟草中2，4-D、2，4，5-T和麦草畏的测定。烟草行业也于2004年制定了相应的行业标准，其中2麦草畏、2，4-D和2，4，5-T选取盐酸水溶液萃取，旋转蒸发浓缩，三甲基氢氧化锍衍生化，GC-MS分析，其前处理复杂费时，检测时间较长，不利于高通量样品的快速准确检测。非水毛细管电泳法的前处理过程复杂，需要萃取与旋蒸浓缩，且检出限较高，在检测低含量的2，4-D残留是存在较大的限制。 

超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）在农残检测的灵敏度以及选择性方面都明显优于传统方法，在分析速度方面优于普通的HPLC方法，而目前未见该检测方法应用检测烟草中的2，4-D残留量。 

发明内容

鉴于此，本发明目的在于提供一种前处理简单、检测时间短，利于高通量样品的快速准确的2，4-D残留量的测定方法。 

为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是，提供 

一种测定烟草中2，4-D残留量的方法，该方法包括以下步骤： 

1）提取烟草中的目标物 

称取烘干磨好的烟叶样品，加入纯水浸润，依次加入氘代内标，乙腈和甲酸，涡漩混合 振荡。放入冰箱冷冻后取出，依次加入无水硫酸镁，氯化钠，柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠，涡旋振荡后离心； 

2）N-丙基乙二胺纯化 

移取上清液于新的离心管中，加入无水硫酸镁及PSA吸附剂，于漩涡振荡混合，然后高速离心；吸取上清液经有机相滤膜过滤，移取滤液，并用乙腈和超纯水稀释后待测； 

3）标准储备液和标准工作液的配制 

用乙腈配置2，4-D标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，-20℃保存。取一定量的各化合物储备液进行混合，用乙腈稀释定容，制得混合标准储备液（10g/mL）； 

用乙腈准确配置2，4-D-d₃氘带内标标准储备液，储存于不透明玻璃瓶中，-20℃保存。取一定量的各内标储备液进行混合，用乙腈稀释定容，制得混合内标标准储备液（10g/mL）。所有的储备液于冰箱-20℃，使用前将其恢复到室温； 

用国际烟草科学研究合作中心（CORESTA）空白烟叶的萃取基质配制不同浓度的2，4-D、2，4-D和2，4，5-T标准工作溶液； 

4）液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定：吸取空白烟叶溶液和配制好的不同浓度的2，4-D标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统，按内标法以峰面积计算出样品待测液中2，4-D残留量。 

优选地，所述烟叶的重量为2g。 

优选地，步骤1）中所述冷冻时间为10min，冷冻温度为-18至-15℃。 

优选地，步骤1）中提取过程依次加入的超纯水，氘代内标(10g/mL)，乙腈和甲酸(49-51%)的体积分别为10mL，20L，10mL和200L。速率涡旋振荡（2000rpm）1min。离心管在-10℃条件下保持10min。依次加入的无水硫酸镁，氯化钠，柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠的质量分别为4g，1g，1g和0.5g。然后漩涡混合振荡的速率为2000rpm，振荡时间为2min，离心（4000rpm）时间为10min。 

优选地，步骤2）中，加入无水硫酸镁及PSA吸附剂的质量为150mg和25mg。