[发明专利]一种以水产品及其加工下脚料为原料生物转化生产γ‑氨基丁酸的方法

权利要求书

1.一种以水产品及其加工下脚料为原料生物转化生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：

（1)乳酸菌生物转化：将具有谷氨酸脱羧酶活性的乳酸菌按照0.5-5％（V/V）的接种量接种至培养基中，并在30-35℃发酵温度下，100-500r/min的转速发酵培养20-50小时，使发酵液中活菌数高达10⁶-10⁷cfu/ml，待用；（2）γ-氨基丁酸的分离纯化：将发酵液通过离心或者过滤除去菌体，取上清液减压浓缩制得GABA粗提液；粗提液用无水乙醇沉淀法去除杂质，然后用大孔树脂、葡聚糖凝胶、阳离子交换树脂依稀进行分离纯化，经分离纯化后的GABA产物经旋转蒸发、冷冻干燥，获得结晶。

2.按权利要求1所述的以水产品及其加工下脚料为原料生物转化生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：所述培养基包括水产品及其水产品加工下脚料的发酵物、碳源、氮源和盐。

3.按权利要求1或2所述的以水产品及其加工下脚料为原料生物转化生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：所述水产品为鱼、扇贝、牡蛎、鱿鱼中的一种或几种的组合；水产品加工下脚料为头、尾、内脏、裙边中的一种或几种的组合。

4.按权利要求1或2所述的以水产品及其加工下脚料为原料生物转化生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：所述培养基按重量百分比计，为水产品及其水产品加工下脚料的发酵液10-30％、葡萄糖0-10％（W/W），氯化钠0-5.0％（W/W），磷酸盐0.1-50％（W/W），谷氨酸或谷氨酸盐每隔3-6小时间隔加入1-5％（W/W），余量为水。

5.按权利要求4所述的以水产品及其加工下脚料为原料生物转化生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：所述谷氨酸或谷氨酸盐每隔3-6小时间隔加入1-5％（W/W）为具有谷氨酸脱羧酶活性的乳酸菌在发酵培养过程中间隔式的向培养基中加入谷氨酸或谷氨酸盐；每3-6小时的间隔加入1-5％（W/W）。

6.按权利要求1所述的以水产品及其加工下脚料为原料生物转化生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：所述具有谷氨酸脱羧酶活性的乳酸杆菌的菌株为短乳杆菌，植物明串珠菌，短双歧杆菌，长双歧杆菌的一种或几种的组合。

7.按权利要求1所述的以水产品及其加工下脚料为原料生物转化生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：将步骤1所得发酵液采用能够特异性使GABA转化的转氨酶，将GABA生成琥珀酸半醛，利用所生成的琥珀酸半醛氧化时，所采用的辅酶氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸可定量地转变成还原型，其中所生成的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸偶联介由给电子体的水溶性腙的生成，由上述的显色过程进而通过比色法对发酵液中GABA进行定量的检测。

8.按权利要求1所述的以水产品及其加工下脚料为原料生物转化生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：

将去除杂质的粗提液经极性大孔树脂洗脱，经湿法装柱，上样液PH控制在4.7-5.1，流速控制在2-4mL/min，收集洗脱液，洗脱液浓缩待用。

9.按权利要求1所述的以水产品及其加工下脚料为原料生物转化生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：将经大孔树脂洗脱收集的洗脱液由葡聚糖凝胶洗脱，洗脱液为蒸馏水，流速2-4mL/min，收集洗脱液浓缩，待用。

10.按权利要求1所述的以水产品及其加工下脚料为原料生物转化生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：将葡聚糖凝胶洗脱液PH调节至2.8-3.2，再由阳离子交换树脂洗脱，流速控制在2-4mL/min，吸附洗脱后采用蒸馏水洗至PH值为6，而后用0.2mol/L氨水洗脱，待茚三酮反应呈蓝色，PH值为6时，收集流出液，直至茚三酮蓝色反应消失为止，合并流出液，浓缩，冷冻干燥，获得结晶。