[发明专利]马布特罗胶体金试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种马布特罗胶体金试纸条，其特征在于，包括：

底板，所述底板具有第一端和第二端，并且沿所述第一端向第二端的方向，所述底板上依次形成有样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，

其中，所述结合物垫上含有胶体金标记的抗马布特罗单克隆的抗体，

所述硝酸纤维素膜上进一步形成有检测线和质控线，所述检测线由能与抗马布特罗单克隆抗体结合的马布特罗检测抗原线状点样组成，所述质控线由能与抗马布特罗单克隆抗体结合的驴抗小白鼠抗体线状点样组成。

2.一种制备权利要求1所述的马布特罗胶体金试纸条的方法，其特征在于，包括下列步骤：

制备硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上形成有检测线和质控线；

制备结合物垫；以及

组装试纸条，

其中，

用能与抗马布特罗单克隆抗体结合的马布特罗检测抗原在所述硝酸纤维素膜上进行线状点样作为检测线；

用能与抗马布特罗单克隆抗体结合驴抗小白鼠抗体在所述硝酸纤维素膜上进行线状点样作为质控线。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，用于制备检测线的马布特罗检测抗原是通过下列方法获得的：

称取50mg马布特罗，用10mL pH1.0的蒸馏水将其溶解作为A液，称取60mg亚硝酸钠用2mL蒸馏水将其溶解作为B液，称取232mg BSA，用pH8.00.01M的PBS溶解作为C液；

冰浴条件下把B液缓慢滴入A液中，4℃磁力搅拌反应4小时后，在冰浴条件下将其缓慢地加入C液中，加完后调pH至8.0，室温磁力搅拌反应过夜；以及

最终产物用0.01M pH7.4的PBS透析除去杂质得到用于制备检测线的马布特罗偶联物。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，其特征是用于制备质控线的抗体是通过下列步骤获得的：

通过在驴体内注射小白鼠免疫球蛋白，并提取含抗体的血清经纯化后制得的，以便获得用于制备质控线的抗体。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述检测线和质控线是通过下列步骤获得的：

将硝酸纤维素膜按20~30mm宽的尺寸剪裁；将经纯化浓度调整为0.2~1.0mg/mL的马布特罗检测抗原，在膜上线状点样作为检测线，其中，检测线点样位置离膜底边15~18mm；

将经纯化浓度调整为0.5~1.5mg/mL的驴抗小白鼠免疫球蛋白抗体，在膜上线状点样作为质控线，质控线点样位置离膜底边11~13mm；

将所述硝酸纤维素膜室温干燥30min，置于1%牛血清白蛋白的生理盐水中浸泡30min，取出吸干水分，于37摄氏度下孵育30min。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，结合物垫是通过下列步骤获得的：

选用能与马布特罗结合的抗马布特罗单克隆抗体标记胶体金；以及

把经过标记的胶体金，分散在玻璃纤维纸上。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，用于标记胶体金的能与马布特罗结合的抗马布特罗单克隆抗体是通过下列步骤制备的：

按Davis的方法将马布特罗—蛋白复合体溶于同体积的磷酸生理盐水和完全佐剂中，免疫BALB/C小鼠，取小鼠脾脏与SP2/O小鼠骨髓细胞融合，融合细胞在选择性培养液中培养7~14d，采用间接竞争ELISA方法筛选分泌抗体的杂交细胞株，杂交细胞株进行三次克隆化，将所产生的克隆细胞株注入小鼠腹腔产生腹水，经纯化后得到用于标记胶体金的能与马布特罗结合的抗马布特罗单克隆抗体。