[发明专利]一种马精子冷冻保存液及其冷冻方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物精子冷冻保存液的制作，尤其适应马精子冷冻保存液的制备，该方法制备的冷冻保存液冷冻效果稳定可靠，显著的提高了马精子冷冻质量。 

背景技术

家畜精液冷冻保存技术最早可追溯到1776年，意大利人Spallanzanei首先发现了自然界中的低温物质(冰雪)可对人精子的活动状态产生影响，1886年，Montegazza报道人精子经过-15℃的低温冷冻处理后仍然有部分存活，并最早提出了利用低温保存动物精液的方法来保存优良品种的设想，基于此设想，很多科学家曾先后应用不同的方法对人、青蛙、兔、鼠、豚鼠及牛的精子进行了大量的冷冻尝试，但均未取得理想效果，直到1949年英国科学家Polge、Smith和Parkes等发现甘油对低温冷冻精液的保护作用后，家畜精液冷冻技术才出现重大突破。 

哺乳动物精子低温保存及冷冻技术是利用干冰(一79℃)、液氮(一196℃)等作冷却源降低或抑制精子新陈代谢水平，将精液经过一系列特殊处理后，长期保存在超低温的状态下，以达到延长精子寿命的目的一项新技术。应用冷冻精液进行人工授精(artificial insemination，AI)，不仅可以解决鲜精所不能远途运输问题，促进不同区域优良种质资源的交流，而且可以延长种公畜遗传物质的使用时间，在保证良种精液的供应、更新血统、引种、降低生产成本等方面都有重要意义。 

关于马精子冷冻技术，半个多世纪以来国外科学家相继报道了数十种马精液冷冻稀释液配方，NFDSM-glucose extender (Kenney et al., 1975) 、HF-20primary extender (Nishikawa,1975)、Lactose-based secondary extender (Tischner, 1979)、Lactose-,mannitol-and glucose-based secondary extender (Naumenkov and Romankova, 1981,1983)、Glucose-EDTA primary extender (Cochran er al,1984)、E-Z Mixin (province et al., 1984,1985)、 Incorporating detergent (Cochran er,al 1984)、Skimmed milk and sugar primary extender(pickett and Amann, 1993)、BSA primary extender (Samper,1995)、Skimmed milk egg yolk secondary extender (samper,1995)、Glycine egg yolk extender (M.Boyle,Cambridge,1996,)、Kenney’s modified tyrodes extender (Ljaz and Ducharme, 1995)、INRA 96 (法国卡苏公司生产的商品稀释液)。国内新疆农业大学耿娟2006年曾对马精液保存、马精液保存稀释液、冻前预处理、冷冻保护剂和解冻进行了研究。从披露的信息来看，马精液冷冻保存液和冷冻方法现在还很不成熟，具体表现为冷冻精子质量差，复苏率低，且因个体差异冷冻效果很不稳定，难以应用于生产实践。有相关专利披露如：一种奶牛性控精子冷冻保存精液稀释液；一种小鼠精子冷冻保护剂；用于藏獒精子保存的冷冻保存液；一种精子的冷冻方法及其冷冻保存液，从检索结果来看，尚未涉及马精子冷冻的制备与方法。 

本发明设计与制备的冷冻保存液的区别是，首次将经特殊处理的马奶和卵黄低密度脂蛋白同时应用于马精子冷冻保存；冷冻方法的不同在于，分步添加冷冻保存液、采用控制性降温、更低的液氮熏蒸高度及更短的熏蒸时间，这些技术改进和创新显著的提高了马精子冷冻效果。 

发明内容

本发明的目的在于：提供的马精子冷冻保存液及其冷冻方法，与常规方法比，该配方更加科学合理，其操作方法简单、稳定，技术效果尤其显著。 

本发明的目的是这样实现的：一种马精子冷冻保存液及其冷冻方法，分步骤实施; 

一、冷冻液和离心液的配制

1）马奶的处理方法