[发明专利]用于抑制二化螟生长的利用acy1-CoA desaturase SexiVPAE基因的双链RNA的合成方法

权利要求书

1.一种二化螟acyl-CoA desaturase SexiVPAE基因片段的dsRNA的合成方法，包括：

(1)根据二化螟acyl-CoA desaturase SexiVPAE基因的cDNA克隆的序列，设计其PCR扩增的上游引物P1和下游引物P2；

(2)在P1和P2上分别添加T7启动子序列“TAATACGACTCACTATAGG”构成引物P3和P4；

(3)以二化螟acyl-CoA desaturase SexiVPAE基因的cDNA克隆为模板，用P1+P4和P2+P3引物对，分别进行两个PCR反应，获得T7启动子在其上游或下游的两种不同PCR产物；

(4)两种PCR产物采用SV Gel和PCR Clean-Up System试剂盒进行回收纯化；

(5)以回收的两种PCR产物为模板，利用T7RiboMAX^TM Express RNAi System试剂盒分别进行体外RNA的转录；

(6)将分别转录的RNA等体积进行混合，70℃变性10min，然后缓慢冷却至室温以形成dsRNA，然后加入DNase和RNase降解DNA和单链RNA，最后对dsRNA进行纯化。

2.根据权利要求1所述的方法，还包括步骤(7)配制二化螟的人工饲料，添加dsRNA至5种不同的浓度梯度。

3.根据权利要求1所述的方法，还包括步骤(8)用含有不同浓度dsRNA的人工饲料喂饲一龄二化螟幼虫，连续喂饲8天后，检测二化螟幼虫的死亡率及存活幼虫的平均体重。

4.根据权利要求2所述的方法，步骤(7)中的浓度梯度为50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml和500ng/ml。

5.权利要求1所述的DNA分子在控制水稻二化螟危害中的应用。