[发明专利]长链非编码RNA基因LINC00312的应用方法有效
申请号: | 201310044009.8 | 申请日: | 2013-01-24 |
公开(公告)号: | CN103074441A | 公开(公告)日: | 2013-05-01 |
发明(设计)人: | 李桂源;张文玲;黄琛;曾朝阳;熊炜;李小玲;李夏雨;范松青;石磊;谭琛;黄东海;赵艳华 | 申请(专利权)人: | 中南大学 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 长沙市融智专利事务所 43114 | 代理人: | 袁靖 |
地址: | 410083 湖南*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 长链非 编码 rna 基因 linc00312 应用 方法 | ||
技术领域
本发明属于肿瘤分子生物学领域,具体涉及长链非编码RNA基因LINC00312的应用方法。
背景技术
鼻咽癌是一种上皮源性的多基因遗传性肿瘤,具有明显的种族和地域差异,临床表现复杂多变,发病机制还不十分清楚,治疗效果也不理想,五年生存率仍徘徊在50%左右。如何揭示鼻咽癌发生发展的分子机制、发现其预后的特异性分子标志物、预测鼻咽癌患者的预后,从而实现对鼻咽癌患者的预后判定,采用不同的针对性治疗方案,实现对鼻咽癌患者的个体化治疗,最终提高五年生存率、降低死亡率,是目前值得临床科研工作者们研究的重要课题。
长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类转录本长度超过200个核苷酸的非编码RNA,研究发现很多lncRNA在肿瘤的发生发展中有重要调节作用,它具有抑制肿瘤生长和促进肿瘤转移等生物学作用。lncRNA根据其基因位置可分为五种类型:正义lncRNA(sense lncRNA)、反义lncRNA(antisense lncRNA)、双向lncRNA(bidirectional lncRNA)、基因内lncRNA(intronic lncRNA)及基因间lncRNA(intergenic lncRNA)。之前一直被认为是转录“噪音”的lncRNA,因在基因调节中的重要功能,目前已成为继miRNA之后非编码RNA领域又一研究热点。近年的研究已表明,lncRNA参与X染色体沉默、基因组印记以及染色质修饰、转录激活、转录干扰、核内运输等多种重要的调控过程。lncRNA有望成为肿瘤诊断、治疗和预后新的标志物,同时也为肿瘤的治疗提供了新的靶点。
LINC00312是一个长的基因间非编码RNA,位于染色体3p25.3,3p25.3-26.3是一个与鼻咽癌发生密切相关的染色体等位基因共同缺失区域。我们利用显微切割技术获得纯净的鼻咽癌组织样本,抽提RNA后通过逆转录,实时定量PCR,检测了LINC00312在鼻咽癌组织中的表达情况,结果显示LINC00312在鼻咽癌组织中表达下调(P<0.001)。我们随后又利用鼻咽癌组织微阵列技术,通过原位杂交的方法,在大样本中验证了LINC00312在鼻咽癌中表达显著下调(P<0.001)。ROC曲线分析发现LINC00312表达能很好区分鼻咽癌患者和非癌患者,因此LINC00312的检测制剂可用于鼻咽癌的辅助诊断。且LINC00312表达与临床进展及肿瘤大小呈负相关,但与淋巴结转移呈正相关,生存曲线分析发现在无淋巴结转移的鼻咽癌患者中LINC00312阳性表达的患者其总生存率和无病生存率高于LINC00312阴性表达的患者,而在有淋巴结转移的鼻咽癌患者中,LINC00312阳性表达的患者其总生存率和无病生存率低于LINC00312阴性表达的患者。多因素分析则证实LINC00312是鼻咽癌预后的独立判断因素。
发明内容
本发明的目的是提供LINC00312基因的应用方法,利用该基因可以制备用于鼻咽癌辅助诊断或者预后预测的制剂。
所述的用于鼻咽癌辅助诊断或者疗效预测的制剂包括原位杂交检测试剂和实时定量PCR检测试剂。
根据该基因序列设计并合成用于原位杂交的寡核苷酸探针,具体序列如下:
5'-ctactataaggaaaagcactatcttctccc-3'
5'-gccttaggtcagattctactagtttaaagc-3'
5'-agactggttgtctgccccatagtagttgtc-3'。
根据该基因序列设计并合成出用于实时定量PCR的检测引物,具体序列如下:
用于实时定量PCR检测的上、下游引物分别为5’-AAGCGAACCAAGCCAATA-3’和5’-CAAATCCCTGAAACTCTG-3’。
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