[发明专利]一种调控人参皂苷积累的PDR转运蛋白基因启动子及其应用

权利要求书

1.一种人参皂苷积累的PDR转运蛋白基因启动子，其特征在于，所述的启动子的DNA序列如SEQ NO.1所示，或是与SEQ ID NO.1具有99%以上同源性的DNA序列。

2.根据权利要求1所述的启动子的制备方法，其特征在于依次包括以下步骤：（1）提取人参根基因组总DNA，以人参根总DNA为模板，构建四个启动子文库：DraI文库、EcoR V文库、Pvu II文库和Stu I文库；（2）分别以构建的DraI文库、EcoR V文库、Pvu II文库和Stu I文库为模板，根据人参PgPDR1基因的5′端序列设计引物，进行PCR扩增；（3）胶回收PCR产物，该产物即得本发明所述的启动子ProPDR1。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中根据人参PgPDR1基因的5′端序列设计的引物为一个引物对：外侧引物和巢式引物，外侧引物如SEQ ID NO.2所示，巢式引物如SEQ ID NO.3所示。

4.含有权利要求1所述启动子的重组载体，其特征在于：所述重组载体为pBI121-ProPDR1::GUS，其中空载体为pBI121载体，在ProPDR1启动子的下游连接GUS报告基因。

5.如权利要求4所述的重组载体的构建方法，其特征在于依次为以下步骤：（1）根据ProPDR1启动子序列设计片段相对应的包含Hind III/Bam HI酶切位点的特异性引物，分别用Bam HI和Nco I双酶切pBI121和启动子ProPDR1，回收pBI121载体和ProPDR1启动子片段；（2）将两片段连接并转化DH5α；（3）通过卡那霉素筛选、PCR和Bam HI/Nco I双酶切鉴定，即获得所述重组载体pBI121-ProPDR1::GUS。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤（1）根据ProPDR1启动子序列设计片段相对应的包含Hind III/Bam HI酶切位点的特异性引物如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：步骤（3）中PCR鉴定所设计的引物如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示。

8.如权利要求1所述的启动子ProPDR1在调控人参皂苷转运与积累或人参育种中的应用。

9.如权利要求4所述的重组载体pBI121-ProPDR1::GUS在调控人参皂苷转运与积累或人参育种中的应用。