[发明专利]一种灵芝孢子油中抗肿瘤组合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物化学及中药学领域，具体涉及一种灵芝孢子油中抗肿瘤组合物及其制备方法。

背景技术

灵芝，为多孔菌科真菌灵芝的子实体。始载于《神农本草经》，后列入《本草纲目》，被列为上品，味甘性平，扶正固本。具有抗肿瘤，免疫调节，抗氧化，抗放射线损伤及化疗药损伤，改善睡眠，强心降压，镇咳平喘的作用。

灵芝孢子粉，为灵芝子实体生长成熟期所产生的生殖细胞灵芝孢子的集合。含有脂肪酸类，甾醇类，三萜类，生物碱类，内酯，蛋白质和氨基酸，糖肽以及无机盐，现代药理研究表明灵芝孢子粉的抗肿瘤的作用：抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的转移，促进肿瘤细胞的分化，抑制肿瘤内血管生成，同时通过增强人体的免疫力达到抗肿瘤的功能。

灵芝孢子油是由破壁灵芝孢子粉中通过超临界CO2提取提出的天然成分，富集了灵芝孢子粉中的灵芝三萜类、脂肪酸类、麦角甾醇类成分，抗肿瘤活性成分比灵芝孢子粉更高，具有调节血脂，增强免疫，抗肿瘤等多方面作用。

但是灵芝孢子油的成分复杂，哪些成分具有更大的抗肿瘤的生物活性在目前还不十分明确，仍然是学术界研究的热点。灵芝孢子油的成分大部分为已知的各种脂肪酸及甘油三酯，其中真正起抗肿瘤作用的成分尚不明确。而有关于灵芝孢子油的抗肿瘤活性应用多是将灵芝孢子油与其他中药或中成药相混合。

中国专利200610086075.1一种富含萜类的灵芝孢子油类制剂加工方法：采用膜分离的方法收集特定分子量的孢子油以提高有效成分含量，其总三萜纯度能提高1倍但是并未提供具体的抗肿瘤活性数据。

中国专利申请20110168831.6一种提高灵芝孢子油抗肿瘤功效的加工方法：采用超声离心静置的方法分离特定层的孢子油以提高抗肿瘤活性，新孢子油得率为26~27%，剂量为160mg/kg时，该新孢子油对小鼠肉瘤的抑瘤率为55.57%，对小鼠胸腔积液中原代肿瘤的抑瘤率为56.06%。但是该新孢子油的抗肿瘤功效的成分并未提及。

发明内容

本发明的目的是提供一种灵芝孢子油中抗肿瘤组合物及其制备方法，该组合物具有良好的抗肿瘤功效。

本发明的目的是通过以下方式实现的：

一种灵芝孢子油中抗肿瘤组合物及其制备方法，它包括以下步骤：

1.1． 将V升的灵芝孢子油加入容积大于5V升的分液容器内，再依次加入0.1-1.0V升的石油醚或乙酸乙酯（分析纯）、0.1-1.0V升的无水乙醇或甲醇（分析纯）和0.5-1.0V升纯净水(18MΩ.cm)；

1.2．将分液容器固定在全自动液液萃取器内，进行提取0.5小时；

1.3.  静置0.5小时后分层，分离下层溶液；

1.4．将下层溶液进行旋蒸浓缩，用甲醇定容至  0.01V升；

1.5  将上述这0.01V 升浓缩液用0.02-0.025V升大孔树脂搅拌，挥干甲醇，再装入0.25-0.6V升的大孔树脂柱进行分离；

1.6  用体积为大孔树脂柱2-3倍的纯净水、50%乙醇及浓度大等于75%乙醇进行梯度洗脱；

1.7  收集浓度大等于75%乙醇的洗脱液；

1.8  将洗脱液经冷冻干燥，真空度为20Pa，冻结温度为-20℃，捕水器温度为-50℃，得到抗肿瘤组合物。

本发明所指的石油醚或乙酸乙酯、无水乙醇或甲醇为分析纯。

或它包括以下步骤：

2.1． 将V升的灵芝孢子油加入容积大于5V升的分液容器内，再依次加入0.1-1.0V升的石油醚或乙酸乙酯（分析纯）、0.1-1.0V升的无水乙醇或甲醇（分析纯）和0.5-1.0V升纯净水(18MΩ.cm)；

2.2．将分液容器固定在全自动液液萃取器内，进行提取0.5小时；

2.3.  静置0.5小时后分层，分离下层溶液；

2.4．将下层溶液进行旋蒸浓缩，用甲醇定容至  0.01V升；

2.5  将上述这0.01 V升浓缩液用0.02-0.025 V升聚酰胺树脂搅拌，挥干甲醇，再装入0.25-0.6 V升的聚酰胺树脂柱进行分离；

2.6  用体积为聚酰胺树脂柱2-3倍的纯净水、50%乙醇及浓度大等于85%乙醇进行梯度洗脱；

2.7  收集浓度大等于85%乙醇的洗脱液；

2.8  将洗脱液经冷冻干燥，真空度为20Pa，冻结温度为-20℃，捕水器温度为-50℃，得到抗肿瘤组合物。