[发明专利]一种自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种自体富血因子血浆PFRP制剂，具体涉及一种自体富血因子血浆PFRP（Platele-factor-rich plasma）制剂的制备方法。

背景技术

临床研究中有报道用富血小板血浆PRP（Plate-rich plasma）凝胶治疗半月板损伤，制备富血小板血浆PRP凝胶需要在富血小板血浆PRP中添加凝血酶和钙离子。凝血酶是血小板活化剂中最有效的成分。动物原性凝血酶以及钙离子的使用，有可能导致外源性的污染，使用剂量不当时也有可能导致组织的损伤。此外，使用富血小板血浆PRP凝胶皮下注射，疼痛明显且充填效果不持久。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种创新型的自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法，制备出疗效好、无明显副作用的自体富血小板因子血浆PFRP制剂。

本发明的另一个目的是提供一种多用途的自体富血小板因子血浆PFRP制剂，异体使用时也不存在免疫风险。不仅能够加速半月板损伤、外伤组织的修复愈合，还能满足医疗美容等多方面的需求。

为达到上述目的，本发明采取的技术方案是：提供一种自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

A、自体富血小板因子血浆PFRP的制备，采集自体全血，利用离心+冻融的方式制备得到自体富血小板因子血浆PFRP；

B、自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备，将得到的自体富血小板因子血浆PFRP与生物支架/自体成体细胞按体积比3:1-1:1混合得到自体富血小板因子血浆PFRP制剂；

步骤A包括以下分步骤：

A1、自体富血小板血浆PRP的制备，采集自体全血，离心后，弃去上段贫血小板血浆和下段红细胞，留取中段自体富血小板血浆PRP并深低温（低于-20℃）冻存；

A2、自体富血小板因子血浆PFRP的制备，将自体富血小板血浆PRP冻融后离心，取富血小板因子血浆PFRP备用，弃去底部膜碎片。

步骤A1中利用抗凝管采集自体外周血。

步骤A1，离心过程中的离心力小于2000g，离心时间为8-10min。

步骤A2，离心过程中的离心力为4000g，离心时间为8-10min。

步骤A2制备的自体富血小板因子血浆PFRP包含的细胞活性分子包括自体全血血浆中的所有非细胞成分，例如细胞因子、生长因子、趋化因子、免疫调节因子、酶、激素等；其中，生长因子包括胰岛素样生长因子IGF-1、转录生长因子TGF-β1、碱性成纤维细胞生长因子FGF-b和血管内皮细胞生长因子VEGF等。

步骤A2制得的自体富血小板因子血浆PFRP中各种生长因子的浓度为自体全血中相应生长因子浓度的2~5倍。

步骤B中的生物支架为商品化的胶原蛋白、透明质酸钠、纳米羟基磷灰石、聚乳酸等可应用于组织修复的生物支架。

步骤B中的自体成体细胞为自体脂肪细胞、自体成纤维细胞、自体间充质干细胞及其它可应用于修复作用的细胞。

所述透明质酸钠包括交联透明质酸钠和不交联透明质酸钠。

一种通过自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法制备的自体富血小板因子血浆PFRP制剂。

一种含有自体富血小板因子血浆PFRP制剂的敷料，由敷布浸在自体富血小板因子血浆PFRP制剂中制得。

本发明采用的生物支架为生物体可吸收、可降解的材料；生物支架起到载体、填充和缓释的作用。

本发明采用的胶原蛋白（collagen）是一种生物性高分子物质，是一种白色、不透明、无支链的纤维性蛋白质。它可以补充皮肤各层所需的营养，使皮肤中胶原活性增强，有滋润皮肤，延缓衰老、美容、消皱、养发等功效；本发明中采用的是双美（Sunmax）胶原蛋白植入剂，注册证号为国食药监械（许）字2009第3460037号，由台湾双美生物科技有限公司研制。

本发明采用的透明质酸钠本身是人体皮肤的构成成分之一，是人体内分布最广的一种酸性黏糖，存在于结缔组织的基质中，具有良好的保湿作用，促进伤口愈合的作用。本发明采用的注射级透明质酸钠，生产厂家为西安力邦制药有限公司，国药准字H20054738。

本发明采用的纳米羟基磷灰石，是一种典型的生物材料，具有优良的生物相容性和生物活性，可作为骨替代材料、整形和整容外科、齿科、层析纯化、补钙剂等。本发明采用的是医用纳米羟基磷灰石/聚酰胺66复合骨充填材料，生产厂家为四川国纳科技有限公司，国食药监械(准)字2007第3460598号。