[发明专利]三阶段基因转录调控提高纤维素乙醇产量的方法及基因工程菌株

权利要求书

1.一种三阶段基因转录调控提高纤维素乙醇产量的方法，其特征在于，所述方法包括通过构建基因XR、XDH、XK、RPE1、RKI1和TAL1的表达质粒，在酿酒酵母中表达上述基因的步骤，其中，用KGD1启动子介导限速基因XK，用HSP26启动子介导关键限速基因TAL1。 

2.根据权利要求1所述的三阶段基因转录调控提高纤维素乙醇产量的方法，其特征在于，对于基因XDH使用启动子pPGK1，对于基因RPE1使用启动子pADH1，对于RKI1使用启动子PGK1，对于基因XR使用启动子pADH1。 

3.根据权利要求1所述的三阶段基因转录调控提高纤维素乙醇产量的方法，其特征在于，基因XR的序列如SEQ ID No.1所示，基因XDH的序列如SEQ ID No.2所示，基因XK的序列如SEQ ID No.3所示，基因RKI1的序列如SEQ ID No.4所示，基因TAL1的序列如SEQ ID No.6所示。 

4.根据权利要求1所述的三阶段基因转录调控提高纤维素乙醇产量的方法，其特征在于，所述方法包括步骤： 

（1）将质粒p61转入酿酒酵母WT，得到WXY1，其菌株含有两基因pADH1-RPE1和pPGK1-XDH； 

（2）将质粒p62转入WXY1，得到WXY2，该菌株额外含有pADH1-XR和pPGK1-XK； 

（3）将质粒p64转入WXY2，得到WXY3，该菌株额外含有多拷贝的pPGK1-RKI1和pADH1-TAL1，并且该菌株能初步利用木糖产生乙醇； 

（4）将质粒pUC-3XK转入酿酒酵母WT，得到WXY4，该菌株含有三基因pADH1-XR/pPGK1-XDH/pPGK1-XK，能初步利用木糖产生乙醇；将质粒pUC-3XK转入WXY3，得到WXY5，该菌株能很好地利用木糖，产生更多的乙醇； 

（5）pv3质粒的构建过程如下：首先将TAL1结构基因连接在pBluscript原始质粒上，接下来依次将启动子CRE1，启动子KGD1r，XK-ORFr，选择标记基因RUR结构，启动子HSP26r，终止子CRE1克隆进来，形成pv3质粒，其表型见表1，整合插入位点为CRE1结构基因，被分别转进WXY3和WXY5，得到了工程菌株WXY6和WXY7； 

（6）将pUC-3X(野生型XR)分别转入酵母菌株酿酒酵母WT，WXY3，WXY6，分别得到工程菌株WXY8，WXY9，WXY10。 

5.三阶段基因转录调控提高纤维素乙醇产量的基因工程菌株，其保藏编号为：CGMCCNo.7191。 

6.一种通过生物发酵制备乙醇的方法，其特征在于，所述方法包括发酵菌株CGMCC No.7191的步骤。