[发明专利]一种促进干细胞粘附、迁移、归巢及血管新生的方法

权利要求书

1.一种促进干细胞粘附、迁移、归巢及血管新生的方法，其特征在于，其包括：从脂肪组织中利用胶原酶和酵素酶分离、筛选获得脂肪源细胞，同时采用纳米分子探针标记，MRI动态示踪其对不同时期血管损伤的修复；其包括步骤：

(1)用包括胶原酶和酵素酶的消化酶溶液分离、筛选获得干细胞或脂肪源细胞，对脂肪源细胞进行免疫荧光鉴定及流式分析鉴定；

(2)以腺病毒为载体，采用基因转染的方式，periostin转染脂肪源细胞使脂肪源细过表达调控蛋白；

(3)检测periostin调控干细胞或脂肪源细胞粘附、迁移及低氧刺激下抗

凋亡的水平；

(4)相关通路阻断剂共培养检测干细胞或脂肪源细胞迁移、诱导分化能力、低氧抗凋亡能力，测定periostin调控干细胞或脂肪源细胞的抗凋亡、促增殖、促迁移能力的变化；

(5)检测获得的过表达periostin的干细胞或脂肪源细胞的存活及迁移浸润及促血管新生能力。

2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中干细胞为成体干细胞、胚胎干细胞或诱导的全能干细胞。

3.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的消化酶溶液中胶原酶NB4和酵素酶的浓度为0.05-0.5％。

4.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)的对脂肪源细胞进行CD11B/CD34/CD31/CD45/KDR/CD90/HLA-1/MHC-2免疫荧光鉴定及流式分析鉴定。

5.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)的调控蛋白为细胞外基质成分，选自调控蛋白periostin。

6.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)的periostin转染脂肪源细胞的浓度为0-1000μmol/ml，标记的细胞量为0-1×10⁸。

7.按权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)的periostin转染脂肪源细胞的浓度为10-100μmol/ml。

8.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法通过观察再生内皮细胞形态，免疫荧光、流式检测CD31、vWF、SMA的表达情况。

9.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中，通过HE，油红，免疫荧光染色和透射电镜检测组织标本的小血管的密度及数量。

10.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中，通过Western-blot和Realtime-PCR测定periostin调控脂肪干细胞粘附、迁移及促进血管新生的能力。