[发明专利]孔鳐软骨多肽类血管生成抑制因子及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及孔鳐软骨多肽类血管生成抑制因子，本发明还涉及该孔鳐软骨多肽类血管生成抑制因子的制备方法，本发明还涉及该孔鳐软骨多肽类血管生成抑制因子的用途。

背景技术

自上世纪70 年代美国哈佛医学院教授Folkman首次提出的“肿瘤生长依赖于血管形成”的观点以后，肿瘤新生血管的形成与肿瘤的生长、转移关系受到普遍关注。诸多研究表明，血管生成是一个由多种细胞因子参与的、动态的、协调的复杂过程，涉及一系列形态学改变（如内皮细胞激活，降解基底膜、内皮细胞的定向运动和增殖、新生微血管、内皮细胞新的基底膜合成、血管腔产生、芽式生长并形成血管襻等一系列步骤）及生物化学改变（如血管生成因子、细胞因子及相关抑制因子之间的调节失衡）。而肿瘤的生长与转移依赖血管生成，建立丰富的血液循环，以供应肿瘤组织异常旺盛的生化代谢以及瘤细胞的繁殖与转移。因此，血管生成是肿瘤生长、发展的必经之路，且与实体瘤的发生、转移有着密切的关系，而抑制新生血管生成，对于恶性肿瘤的防治具有重要意义。

目前，人们已针对血管生成不同环节开发破坏或抑制血管生成，有效地阻止肿瘤生长和转移的药物----肿瘤血管生成抑制剂（tumor angiogenesis inhibitor，TAI），如针对血管内皮细胞抑制其增殖、诱导其凋亡而达到抗肿瘤目的的endostatin和agiostain等；针对血管内皮生长因子（VEGF）或其受体（VEGFR）的药物avastin和anti-huMAB-VEGFR1等。

软骨是一种无血管组织，对肿瘤侵噬具有一定的抵抗性，目前已从鲨鱼软骨中分离得到了多种血管生成抑制因子，如：1983年Lee和Langer首次报道从姥鲨的鳍和脊椎软骨中制备了新血管生成抑制因子SCAPI，1997年王路等从中国姥鲨软骨中获得新生血管抑制因子SCDI，1998年Sheu等从青鲨软骨中分离纯化了相对分子量分别为10 kDa和14 kDa两条多肽组成的新血管生成抑制因子U-995，1999年王树森等从鲨鱼软骨中获得了相对分子量为32 680 Da的血管生成抑制因子CDAI，2000年美国加州大学的Liang等从鲨鱼软骨中分离纯化获得相对分子量大约为10 kDa的新型血管生成抑制因子SCF2，2000年和2001年沈先荣等从鲸鲨软骨中提取分离了两种高纯度血管生成抑制因子SCAIF1（18 kDa）和SCAIF80（80 kDa），2001年和2003年曾锋等以广东阳江鲨鱼软骨为原料，分离出新生血管生成抑制因子SCAI-a（12.6 kDa）和SCAI-c（17.4 kDa）。孔鳐与鲨鱼同属软骨鱼类，研究表明孔鳐软骨成分中亦含有与鲨鱼软骨血管生成抑制因子类似的抗肿瘤活性物质，如马润娣等从孔鳐软骨中制备了分子量为42 kDa血管生成抑制因子I（中国发明专利：公开号CN 1978464A），王斌等从孔鳐软骨中制备了分子量为36.2 kDa血管生成抑制因子RCAIF-I（中国发明专利：公开号CN102167725 A）。但是，软骨鱼类血管生成抑制因子分子量多处于10-100 kDa之间，具有分子量大不能透过半透膜、易受体内酶和细菌以及体液的破坏、半衰期短、清除率高、生物利用度低等蛋白类药物的缺点，限制了软骨类血管生成抑制因子的深入开发。因此，寻找分子量小、活性显著和稳定性强的血管生成抑制因子成为软骨活性物质研究的重点。众所周知，蛋白质的生理功能取决于其特定的氨基酸序列，用合适的蛋白酶水解，就能释放出天然、高效、新颖和稳定性强的生物活性肽。基于此，以孔鳐软骨为实验材料，通过对酶解工艺和制备技术的综合应用，将有可能获得活性显著和稳定性强的血管生成抑制因子，为海洋抗肿瘤药物的开发提供候选药物。

   但是，申请人研究发现，以孔鳐软骨为原料，利用酶解技术制备多肽类血管生成抑制因子的工艺研究处于空白阶段，而以酶解产物为材料制备高活性多肽类血管生成抑制因子及其应用更是未见报道。

 

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对上述的技术现状提供孔鳐软骨多肽类血管生成抑制因子，该血管生成抑制因子能有效抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成，以及人肺癌细胞A-549和人肝癌细胞株Bel-7402的增殖。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供孔鳐软骨多肽类血管生成抑制因子的制备方法，该工艺科学合理、易于操作。

本发明所要解决的第三个技术问题是提供孔鳐软骨多肽类血管生成抑制因子在制备抑制血管生成、防治肿瘤的药物中的应用。