[发明专利]一种昆明狼犬精液冷冻液配方及配制方法

说明书

技术领域

本发明属于精液冷冻液技术领域，尤其涉及一种昆明狼犬精液冷冻液配方及配制方法。 

背景技术

犬是最早被人类驯化的家畜，目前数量最多的也是犬科动物，是世界上外形差异最大、分布最广和品种最多的家畜。人工授精(AI)对犬业的发展至关重要，而人工授精技术的推广依赖于精液的长期保存。与其他动物(如牛、猪)相比，犬人工授精发展的速度缓慢，其主要原因是精液冷冻技术不过关，精液不能长期保存。 

发明内容

针对上述问题，本发明实施例的目的在于提供一种昆明狼犬精液冷冻液配方及配制方法。 

本发明实施例是这样实现的，一种昆明狼犬精液冷冻液配方，其组成成分为： 

三羟甲基氨基甲烷2.4～2.46g、柠檬酸钠1.26～1.27g、双羟乙基一氨基乙烷磺酸1.50g、甘油4ml、葡萄糖2.0～2.126g、家鸽卵黄20ml、加灭菌双蒸水到100ml、青霉素10万单位、链霉素5万单位。 

进一步，pH在6.5～6.8之间。 

进一步，每100ml所述昆明狼犬精液冷冻液配方可加入VB₁₂12ml、复合VB4ml、V_C0.50g。 

进一步，复合VB的组分为：每2ml含B₁20mg，B₂2mg，B₆2mg，烟酰胺30mg。 

进一步，复合VB的添加量为4mL/100mL、V_C的添加量为0.50g。 

为进一步改进犬精液冷冻方法，提高冻配受胎率，本发明通过对不同配方的稀释液、添加不同剂量的不同维生素对解冻后精子活力影响的试验，提供了一种优良稀释液，达到提高冷冻精液精子成活率的目的，为进一步在生产当中提高冷冻精液的品质提供一定参考。 

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。 

本发明实施例提供了一种昆明狼犬精液冷冻液配方及配制技术，其组成成分为：三羟甲基氨基甲烷2.4～2.46g、柠檬酸钠1.26～1.27g、双羟乙基一氨基乙烷磺酸1.50g、甘油4ml、葡萄糖2.0～2.126g、卵黄(家鸽)20ml、加灭菌双蒸水到100ml、青霉素10万单位、链霉素5万单位。pH在6.5～6.8之间。每100ml加入VB₁₂12ml、复合V_B(每2ml含B120mg，B22mg，B62mg，烟酰胺30mg)4ml、V_C0.50g更有助于保护精子。 

以下结合具体的试验结果对本发明作进一步的说明。 

1试验材料 

1.1试验动物：昆明狼犬5只、体重20～30kg、年龄2～8岁、健康、体况良好。 

1.2试验试剂：三羟甲基-氨基甲烷、双轻乙基-氨基乙烷磺酸、葡萄糖、乳糖、果糖、柠檬酸、甘油、青链霉素、卵黄、姬姆萨染液、伊红-苯胺黑死活染色液、维生素B₁₂、维生素C、复合维生素B等。 

1.3试验仪器：电光生物显微镜、细胞计数器、恒温箱、离心机、液氮罐、pH试纸等。 

1.4试验地点：四川农业大学动物医学院胚胎工程基地、奶牛疾病康复中 心。 

1.5试验动物处理：试验前2周进行犬瘟热、细小病毒疫苗免疫，适应性单笼饲养，主要以犬粮附以少量生肉及牛杂等定时、定量、由固定饲养员常规饲喂，自由饮水，采精后每只犬补食两枚生鸡蛋。 

2试验方法 

2.1精液的采集 

用拇指和食指握住犬阴茎，轻拉包皮，将龟头球握在手掌内并给予适当压力，待阴茎充分勃起，用集精漏斗收集精液。 

2.2精液品质的常规检查 

2.2.1精液的气味与色泽的检查：无异味、乳白色或淡乳白色者为正常精液；否则均为不正常。 

2.2.2精液的pH值检查：取一小滴精液用pH值为5.0～8.4的精密试纸测定。 

2.2.3精子活力的检查：将精液置于37℃的显微镜下，放大400～600倍镜检，用10级评分法作初步评分。进一步用伊红一苯胺黑死活染色法检测(活精子不着色)。 

精子活率＝呈直线运动精子数/总精子数×100％。