[发明专利]一种绞股蓝皂苷A的检测方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种绞股蓝化学成分的检测方法，具体涉及一种绞股蓝皂苷A的检测方法及其应用。

背景技术

绞股蓝为葫芦科植物绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino及长梗绞股蓝G.Longipes的全草，又名七叶胆、小苦药等，具有清热解毒、止咳祛痰、益气养阴、降低血脂、延缓衰老等作用，是中国药典中未收藏的品种。

绞股蓝的化学成分较为复杂，主要含皂苷类、黄酮类、多糖类、维生素、氨基酸等多种生理活性物质，其中的皂苷类是主要活性成分。

然而，目前鲜见对绞股蓝中药材或药物组合物制剂中单一成分的检测方法。例如，绞股蓝总苷片是一种由绞股蓝加工制成的片剂，具有养心健脾、益气活血、除痰化瘀、降血脂的功效，常用于高血脂症，见有心悸气短，胸闷肢麻，眩晕头痛，健忘耳鸣，自汗乏力或脘腹胀满等心脾气虚，痰阻血瘀者，有研究认为绞股蓝总苷片治疗高脂血症的疗效及安全性优于西药，是一种安全有效耐受性良好的调脂药物。虽然使用广泛，但现有的检测绞股蓝总苷片的标准仍为1994年的卫生部部颁标准，其含量测定项下采用紫外分光光度法，专属性不强，线性差，准确度不高，并且还用到了高氯酸等有强腐蚀性的毒性试剂，不利于对绞股蓝中药材或药物组合物及其制剂进行快速、有效、安全的测定，也不利于进行质量标准控制。

因此，目前还需要寻找一种更加安全、准确的绞股蓝成分测定方法。

发明内容

因此，本发明的目的在于弥补现有技术中对绞股蓝中药材或药物组合物或其制剂的检测方法的欠缺，提供了一种专属性强、准确度高、操作安全的绞股蓝皂苷A的检测方法，以及该检测方法在检测绞股蓝中药材或含有绞股蓝的药物组合物或其制剂中的应用，特别是在用于控制绞股蓝总苷片的质量中的应用。

发明人发现，目前对绞股蓝进行单一成分的检测方法较为少见。因此，发明人针对现行的卫生部部颁标准中的有关检测方法加以大幅改进，通过采用HPLC-ELSD联用技术对绞股蓝皂苷A进行定性定量检测，从而可用于检测绞股蓝中药材或药物组合物或其制剂，以及可特别适用于控制绞股蓝总皂苷片的质量。

本发明提供了一种绞股蓝皂苷A的检测方法，该方法包括以下步骤：

（1）待测品溶液的制备：将绞股蓝待测品粉碎，称取0.3~0.5g，可优选为0.4g，加入20~30ml甲醇溶解，称定质量，超声处理20~40min，放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀、滤过，取续滤液，即为待测品溶液；

（2）对照品溶液的制备：称取绞股蓝皂苷A对照品适量，加甲醇溶液，制成每1ml含有0.1~0.3mg绞股蓝皂苷A的溶液，即为对照品溶液；

（3）测定含量：量取同样体积的1~15μl，可优选为10μl的待测品溶液和对照品溶液，分别在相同的色谱条件下采用HPLC-ELSD联用技术测定峰面积，对比计算待测品溶液中绞股蓝皂苷A的含量，然后计算得到绞股蓝待测品中绞股蓝皂苷A的含量。

由于绞股蓝皂苷A的紫外吸收性较差，如仍按照现有的卫生部部颁标准进行检测，则干扰较大，结果准确度可能难以满足当前的药物质量控制需求，效果不甚理想。通过采用HPLC-ELSD联用，不仅克服了UV检测不准确的问题，还大大提高了定量检测的准确度，同时可避免使用高氯酸等腐蚀性试剂。

所述绞股蓝待测品可以为绞股蓝中药材，或者含有绞股蓝的药物组合物或其制剂。作为优选，所述绞股蓝待测品为绞股蓝总苷片。

根据本发明的检测方法，其中，在步骤（1）中，将所述绞股蓝待测品粉碎后过60~80目筛，可以优选为过80目筛。

根据本发明的检测方法，其中，步骤（1）中，加入25ml的甲醇溶液。作为优选，所述甲醇为10~100vol%的甲醇溶液，可以更优选为60vol%的甲醇溶液。发明人发现，如果体积分数小于10%，提取效果较差，且需要花费更多的超声处理时间，同时还发现，当甲醇的体积分数为60%时，在超声处理相同时间的情况下，提取效果最好。

根据本发明的检测方法，其中，步骤（1）中，超声处理的时间可以为30min。作为优选，超声功率为50~1500W，更优选为600W。发明人发现，如果超声处理时间短于30min，则提取效果较差，而如果长于30min，提取效果的增加量不明显，同时又浪费了处理时间和成本，因而发明人可优选超声处理时间为30min，提取效果即可达到最佳的水平。