[发明专利]替加环素侧链中间体的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及替加环素侧链中间体的检测方法，具体涉及N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐或N-叔丁基甘氨酸盐酸盐的纯度及有关物质含量检测方法。

背景技术

替加环素，是一种新的、可在治疗初期当病因尚未明确时供选择的广谱抗生素。其化学名：(4S,4aS,5aR,12aS)-4,7-双(二甲氨基)-9-[(叔丁基氨基)乙酰胺基]-3,10,12,12a-四羟基-1,11-二氧代-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-八氢并四苯-2-甲酰胺，又称9-叔丁基甘氨酰胺基米诺环素或丁甘米诺环素，是首个获准上市的甘氨酰环素类抗生素，分子式为：C₂₉H₃₉N₅O₈；分子结构式如下：

目前，在替加环素的生产过程中，一般采用的合成步骤为：盐酸米诺环素经硝化制备9-硝基米诺环素，9-硝基米诺环素经氢化制备9-氨基米诺环素盐酸盐，N-叔丁基甘氨酸盐酸盐制备N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐，将9-氨基米诺环素盐酸盐与N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐反应，生成替加环素。替加环素中的已知杂质、合成原料的结构见下表：

为了控制替加环素的合成质量，研究人员已经建立了对替加环素终产物、9-氨基米诺环素盐酸盐以及替加环素差向异构体等杂质的检测方法。然而，对侧链中间体原料——N-叔丁基甘氨酸盐酸盐或N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐的质量控制方法，还未见有研究报道。

发明内容

本发明的目的在于提供替加环素侧链中间体原料N-叔丁基甘氨酸盐酸盐或N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐的检测方法。

本发明提供了N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐的检测方法，它是采用高效液相色谱法进行测定的，操作步骤如下：

（1）取N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐，溶解后，制备供试品溶液；

（2）将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，按照面积归一法检测即可；其色谱条件如下：

色谱柱：以氨基键合硅胶为填充剂；

流动相：甲醇-异丙醇体积比：（85~95）︰（15~5）；

检测波长：210~215nm；

检测柱温为25-40℃。

其中，步骤（1）中，溶解所用溶剂为乙腈。

进一步地，流动相为：甲醇-异丙醇体积比：90︰10。

进一步地，检测波长为210nm或211nm。

进一步地，所述色谱柱的尺寸为250mm×4.6mm，5μm。

其中，检测柱温为25-40℃。

进一步地，检测柱温为30℃。

进一步地，供试品中，N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐的浓度不低于0.5mg/ml。

本发明还提供了N-叔丁基甘氨酸盐酸盐的检测方法，它是采用高效液相色谱法进行测定的，操作步骤如下：

（1）取N-叔丁基甘氨酸盐酸盐，溶解后，制备供试品溶液；

（2）将供试品溶液分别注入高效液相色谱仪中，按照面积归一法检测即可；其色谱条件如下：

色谱柱：以氨基键合硅胶为填充剂；

流动相：甲醇-异丙醇体积比：（85~95）︰（15~5）；

检测波长：210~215nm；

检测柱温为25-40℃。

进一步地，步骤（1）中，溶解所用溶剂为步骤（2）所述的流动相。

进一步地，检测波长为210nm或211nm。

进一步地，流动相为：甲醇-异丙醇体积比：90︰10。

进一步地，所述色谱柱的尺寸为250mm×4.6mm，5μm。

其中，检测柱温为25-40℃。

进一步地，检测柱温为30℃。

进一步地，供试品溶液中，N-叔丁基甘氨酸盐酸盐的浓度不低于10mg/ml。

本发明检测方法可以将待测物与杂质峰有效分离，准确测定N-叔丁基甘氨酸盐酸盐和N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐的纯度以及有关物质含量，测定结果稳定可靠，专属性强，为控制替加环素合成过程中的原料质量提供了可能。

附图说明

图1N-叔丁基甘氨酸盐酸盐HPLC图。

图2N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐HPLC图。

图3空白溶剂HPLC图。

图4N-叔丁基甘氨酸盐酸盐对照品HPLC图。

图5N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐对照品HPLC图。

图6N-叔丁基甘氨酸盐酸盐对照品HPLC图。