[发明专利]叶黄素酯皂化程度快速测定方法

说明书

技术领域

本发明属于生物化学技术领域，涉及一种测定叶黄素酯皂化程度的方法，特别涉及一种叶黄素酯皂化程度快速测定方法。 

背景技术

叶黄素是类胡萝卜素的一种，广泛存在于自然界的植物中。由于这种天然色素具有色泽鲜艳、着色力强、安全无毒、富含营养等特点，越来越受到人们的重视，广泛应用于食品、化妆品、禽类饲料等领域。着色剂类（叶黄素）饲料添加剂就是利用金盏花中富含的天然叶黄素，将金盏花浸膏中的叶黄素酯类衍生物转化为游离叶黄素供禽类吸收。目前采用的工艺大都是先将浸膏加碱皂化，然后用吸咐剂吸收混合，但在皂化过程中叶黄素酯皂化程度的测定却是难点，叶黄素酯皂化程度测定 一般采用HPLC（高效液相色谱）法，此方法虽然比较准确，但对测定条件要求很高，设备昂贵，标准品不易保存，测定耗时长，在实际生产中指导意义不大。如何快速简便的测定叶黄素酯是否完全皂化是生产中的一项技术难题。 

发明内容

本发明的目的是提供一种叶黄素酯皂化程度快速测定方法，不仅结果准确，而且对测定条件要求较低，测定时间短。

本发明所采用的技术方案是：一种叶黄素酯皂化程度快速测定方法，利用叶黄素酯和叶黄素在不同溶剂中的溶解性，采用薄层层析法快速简便的测定叶黄素酯皂化程度，该快速测定方法的具体步骤为：

a）取金盏花浸膏皂化过程中生成的皂化液溶于四氢呋喃中，制成样液；

清洗玻璃板，干燥；

将硅胶研磨成粘稠状的硅胶糊；

b）将硅胶糊均匀涂布在干燥后的玻璃板上，烘干，制成层析板； 

c）用微量进样器抽取样液，在层析板的硅胶铺层表面点样，冷风吹干；

d）将石油醚和乙酸乙酯配成展开剂，将点样后的层析板放入注有展开剂的层析缸中，展开剂液面低于样点，层析板上的样液不能渗入展开剂中，于暗处展开，当展开剂到达层析板顶部时，取出层析板暗处风干；

e）若风干层析板上的样斑没有展开，则说明金盏花浸膏完全皂化，停止金盏花浸膏的皂化；若风干层析板上的样斑展开，则说明金盏花浸膏未完全皂化，继续皂化金盏花浸膏，并按上述步骤重复检测金盏花浸膏的皂化进程，直至风干层析板上的样斑不再展开，停止皂化。

本发明快速测定方法利用叶黄素酯和叶黄素分子在溶剂中溶解性的不同，以四氢呋喃为溶解剂，以石油醚和乙酸乙酯的混合液为展开剂，采用薄层层析法快速简便的测定叶黄素酯皂化程度。经过HPLC（高效液相色谱）法对比，测定结果准确，解决了HPLC法对测定条件要求很高，测定耗时长的缺点，在实际生产中应用效果显著。

附图说明

图1是完全皂化的叶黄素酯样斑用展开剂处理后的状态图。

图2是未完全皂化的叶黄素酯样斑用展开剂处理后的状态图。

图3是未皂化样斑色谱图。

图4是完全皂化样斑色谱图。

具体实施方式

由于叶黄素在叶黄素浸膏中是以叶黄素酯的形式存在，因此金盏花浸膏中的叶黄素在分离纯化前首先要进行皂化，使叶黄素单体从叶黄素酯中分离出来，而皂化效果的好坏可以用皂化程度表示，游离态的叶黄素分子极易溶于极性有机溶剂中，溶于（mg/L）: 丙酮800，乙睛100，苯600，氯仿6000，环己烷50，环己酮4000，二氯甲烷800，二甲基甲酞胺1000，乙醇300，乙酸乙酯800，乙醚2000，己烷20，异丙醇400，甲醇200，叔丁酸甲醋2000，四氢呋喃8000，甲苯5000，叶黄素分子在四氢呋喃中溶解性最好，在石油醚和乙酸乙酯中溶解性较差，而叶黄素酯在石油醚和乙酸乙酯中溶解性很好，在四氢呋喃中溶解性较差。本发明就是利用叶黄素酯和叶黄素在不同溶剂中的溶解性，采用薄层层析法快速简便的测定叶黄素酯皂化程度，具体步骤为：

a）取金盏花浸膏皂化过程中生成的皂化液1.00g溶于10ml四氢呋喃中，制成样液；

选用平整光滑的玻璃板（规格为10cm×20cm），用洗液洗净，干燥；

称取7 g硅胶，加适量0.1 mol·L^-1硼酸溶液于研钵中充分研磨，形成粘稠状的硅胶糊，当该硅胶糊发出脂肪光泽时，停止研磨；

b）将硅胶糊均匀涂布在干燥后的玻璃板上，硅胶糊的铺层厚度为0.4 mm；将铺层后的玻璃板置于100℃烘箱中烘干，制成层析板，置于干燥器中备用；

c）用微量进样器抽取样液，在距离层析板底边2 cm的水平线上轻轻接触铺层表面，在铺层表面点样，点样的样液量不超过300μL，吹风机冷风吹干；