[发明专利]一种中和犬瘟热病毒的单克隆抗体及抗体组合物

说明书

技术领域

本发明涉及中和犬瘟热病毒（CDV）单克隆抗体2G3及抗体组合物，属于生物技术领域，涉及抗体工程技术。具体为单克隆抗体2G3对CDV具有高的中和活性，与另一种作用于CDV不同抗原表位的中和单克隆抗体1D7组合产生抗病毒协同增强作用，中和能力得到提高，中和CDV毒株范围广泛，可应用于犬瘟热（CD）发病动物的临床治疗。

背景技术

犬瘟热病毒（CDV）是引起犬、狐狸和水貂等多种动物发生犬瘟热（CD）的病原，可感染动物体内多种细胞和组织，以淋巴细胞和上皮细胞的亲嗜最强，是一种泛嗜性病毒，对动物危害极大。CDV在病毒学分类上属于副黏病毒科麻疹病毒属，为不分节的负链RNA，主要编码核衣壳蛋白( N)、融合蛋白( F)、血凝或附着蛋白( H)、基质膜蛋白( M)、大蛋白( L)和磷蛋白( P)。病毒RNA被螺旋状衣壳包裹，由N蛋白、P蛋白和L蛋白组成，N蛋白是病毒蛋白中含量最多、保守性最强的免疫原性蛋白，P蛋白和L蛋白则具有聚合酶活性。病毒囊膜表面的H和F蛋白通过M蛋白与核衣壳连接，在病毒吸附和侵入宿主细胞过程中起作用。CDV只有一个血清型，但近年来研究发现，目前CDV主要流行毒株与免疫预防使用的弱毒疫苗株存在不同程度的抗原性差异。

犬瘟热几乎分布世界各国，自然宿主广泛，传染性强、发病率和死亡率高，并可引起机体免疫抑制，继发或混合感染其它病原。近年来，我国宠物犬、警犬、实验用犬等的饲养量不断增加，以水貂、狐、貉等为饲养对象的经济动物养殖业也迅猛发展。然而犬瘟热在我国的发病率却有升高的趋势，该病不仅在非免疫动物中发病率和致死率很高，而且用弱毒疫苗免疫动物也未能得到完全保护，有许多免疫动物群体暴发犬瘟热，损失十分惨重。此外，随着CDV自然感染的宿主范围不断扩大，熊猫、熊、狮子和老虎等珍稀野生动物也经常发生犬瘟热，严重危害我国野生动物保护业的健康发展。发生犬瘟热的动物，种类和数量较多，经济价值较高，有些伴侣动物（如宠物犬等）被视为家庭成员，因此对犬瘟热除了积极的预防外，有必要对患病动物进行有效的治疗，将损失降到最小。

犬瘟热是一种病毒性传染病，一旦发病还没有特效的治疗药物，发病时用特异性抗体进行治疗是主要的方法。犬瘟热病毒的高免血清常用于治疗犬瘟热，但制备成本较高，易传播其它病毒，抗体中和效价参差不齐，难以标准化。因此制备特异性好，抗体中和效价高，易于标准化，制备成本低的单克隆抗体是必然选择。近几年的流行病学调查显示，CDV流行毒株与疫苗毒株之间存在变异导致不同程度的抗原性差异，单克隆抗体只针对病毒的单一抗原表位，因此存在单克隆抗体因病毒抗原表位变异而失去中和作用，不能有效杀灭病毒的风险。联合使用针对不同抗原表位的两种或两种以上的单克隆抗体，可以避免或减少因病毒抗原性差异导致的治疗失败，获得更好的疗效。另外，使用两种或两种以上的单克隆抗体还有可能产生抗病毒协同增强效应，增强抗体中和病毒的能力。美国FDA批准的单克隆抗体药物CL184组合就是采用CR57和CR4098两个单克隆抗体的混合物治疗狂犬病毒感染，取得了跟市售高免疫血清中提取的免疫球蛋白制品相似或更好的效果。

之前，我们用新分离的CDV NJ01株作为免疫原制备犬瘟热病毒单克隆抗体杂交瘤细胞库，从中筛选到一株分泌高中和活性犬瘟热病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞1D7株，用其制备的单克隆抗体1D7可以中和不同动物源的CDV毒株。本发明又筛选制备了另一种中和犬瘟热病毒的单克隆抗体2G3，与单克隆抗体1D7识别作用的CDV抗原表位不同，而且将单克隆抗体2G3与单克隆抗体1D7进行组合，产生抗病毒协同增强作用，中和病毒的能力得到增强，抗犬瘟热病毒毒株的范围更广泛。

发明内容

技术问题

犬瘟热是犬和肉食目中多种动物的一种高度接触性传染病，尽管免疫预防是防控该病的指导原则，但最近几年却不断有免疫动物发生犬瘟热的状况。因此要对犬瘟热发病动物进行及时有效地治疗。目前临床上主要采用犬瘟热的高免血清和单克隆抗体对其进行治疗。犬瘟热高免血清存在生产成本偏高，易传播血源性疾病，中和效价参差不齐，难以标准化等问题，单克隆抗体可以弥补以上缺陷，但单克隆抗体识别作用抗原位点单一，使用一种单克隆抗体治疗犬瘟热，可能对不断出现的犬瘟热病毒变异株失去中和能力。

本发明的目的是提供一种中和CDV的单克隆抗体及抗体组合物。该单克隆抗体是通过病毒中和试验从建立的CDV单克隆抗体杂交瘤细胞库中筛选得到的，与另一种识别作用CDV不同抗原表位的单克隆抗体组合，中和能力得到显著增强，抗犬瘟热病毒毒株的范围更广泛。

 

技术方案