[发明专利]桑黄菌中环二肽C2的分离技术

权利要求书

1.桑黄菌中环二肽C2的分离方法，其步骤顺序如下：

(1)制备桑黄菌粗提物；

(2)将上述步骤（1）所得的粗提物与正相硅胶混匀搅拌，并干燥，进行硅胶正相柱层析，使用洗脱剂洗脱3-5次；

(3)收集步骤（2）中的最后一次洗脱液，减压干燥，与等体积硅胶拌样，再次进行正相硅胶层析，使用洗脱剂洗脱；

(4)收集上述步骤（3）中得到的洗脱液，减压浓缩，使用甲醇溶解，甲醇凝胶柱层析，用洗脱剂洗脱，使用TLC检测收集的洗脱液，适当合并洗脱液，减压干燥；

(5)对步骤（4）得到的产物进行反相硅胶层析，洗脱剂为甲醇和水；

(6)收集洗脱液，减压蒸干，进行甲醇凝胶层析；

(7)HPLC检测，适度合并洗脱液，减压干燥，即为环二肽C2。

2.如权利要求1所述的一种从桑黄菌中分离苯乙醇的方法，其特征在于所述桑黄粗提物，由下述方法制得：

(1)发酵培养基配方以克/100毫升计是：

玉米淀粉    1-5%             葡萄糖      1-5%

蛋白胨     0.1-0.5%          酵母膏     0.1-0.5%

硫酸镁     0.1-0.5%          磷酸二氢钾 0.01-0.05%

(2)如权利要求1所述桑黄粗提物的发酵培养方法是，将桑黄菌种以常规方法接种到装有液体培养基的三角烧瓶内，以20～35℃温度，摇瓶转速为80～280r/min，pH 3～8条件下，震动培养7～15天；培养中当pH值降到2.5～4时，将摇瓶中的种子接种到50L发酵罐的培养液中，以温度20～35℃，发酵罐压力0.1～0.2公斤/平方厘米，pH 3～8，通气量0.5～1.1vvm，搅拌速度100～280转/分的条件，培养7～15天，即可利用桑黄菌丝体发酵全液制备桑黄粗提物；

(3)取步骤(2)中所得桑黄菌丝体发酵全液，将其以常规方式减压浓缩，使其体积浓缩到原体积的1/2～1/5；

(4)用体积百分比为60～95%的乙醇对上述步骤(3)浓缩后的发酵液进行提取，其中，加入乙醇的量是浓缩液体积的2～5倍，能够使提取液中乙醇浓度达到60～90%；

(5)对步骤(4)所得提取液在50～70℃条件下，加热1～2小时；以常规方法进行分离，并通过二级过滤除去杂质，分离获得乙醇提取液；将上述乙醇提取液以常规方式减压浓缩，使其体积浓缩到原体积的1/5～1/10；

(6)将将步骤(5)所得的浓缩液以低温冷冻干燥的方法进行干燥，得桑黄粗提物。

3.如权利要求1所述的桑黄菌中环二肽C2的分离方法，其特征在于所述的环二肽C2为六氢-7  - 羟基-3 - （苯基甲基）吡咯并[1,2-a〕吡嗪-1,4 - 二酮。

4.如权利要求1所述的桑黄菌中环二肽C2的分离方法，其特征在于，步骤(2)中所述的拌样硅胶为100-200目正相硅胶。

5.如权利要求1所述的桑黄菌中环二肽C2的分离方法，其特征在于，步骤(2)中所述的层析硅胶为正相200-300目，洗脱剂为氯仿或甲醇。

6.   如权利要求1所述的桑黄菌中环二肽C2的分离方法，其特征在于，步骤(3)中所述的硅胶用量为等体积，洗脱剂为氯仿与甲醇。

7.如权利要求1所述的桑黄菌中环二肽C2的分离方法，其特征在于，步骤(4)中所述的凝胶为Sephadex LH-20或者Sephadex LH-25，洗脱剂为甲醇。

8.如权利要求1所述的桑黄菌中环二肽C2的分离方法，其特征在于，步骤(5)所述的反相材料为C-18或者C-8。

9.如权利要求1所述的桑黄菌中环二肽C2的分离方法，其特征在于，步骤(5)所述的洗脱剂为甲醇：水=15%-70%。

10.如权利要求1所述的桑黄菌中环二肽C2的分离方法，其特征在于，步骤(6)所述的凝胶为甲醇凝胶。

11.如权利要求1所述的桑黄菌中环二肽C2的分离方法，其特征在于，步骤(7)所述的HPLC条件为，0min,100%A水→10min，100%甲醇。

12.如权利要求1所述的桑黄菌中环二肽C2的分离方法，其特征在于，步骤(7)所述的HPLC出锋时间为5.3-5.9min。