[发明专利]一种猪传染性胃肠炎、流行性腹泻二联活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种猪传染性胃肠炎、流行性腹泻二联活疫苗，属于兽用生物制品领域。

背景技术

猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）引起的猪的一种高度接触性、致死性传染病，以引起2周龄以下仔猪呕吐、严重腹泻和脱水为主要特征。其中2周龄内仔猪死亡率可达到100%，5周龄以上的猪病死率较低，较大或成年猪几乎没有死亡，然而可引起掉膘、降低饲料报酬、增加药费和人力等开支，造成严重损失。该病1933年起在美国广泛流行，1946年由Doyle等确定本病的病原，以后世界上许多国家和地区（日本、英国、法国、荷兰、德国、意大利、前苏联、中国台湾省等）都相继报道。从60年代末起，我国许多省、市都有本病流行（殷震，刘景华.动物病毒学.第二版.北京：科学出版社.1997.11:681-683）。

TGEV属于冠状病毒科冠状病毒属（Coronavirus），是一种单股正链RNA病毒。本病毒只有一个血清型，与猪流行性腹泻病毒抗原无抗原交叉性。病猪及带毒猪是主要的传染源，主要经消化道、呼吸道传染给易感猪，病毒也可通过乳汁传给仔猪。

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）引起的猪的一种急性接触性肠道传染病，以呕吐、腹泻、食欲下降和脱水为基本特征，各种年龄的猪均易感。本病的临床症状和病理变化都与猪传染性胃肠炎十分相似，但哺乳仔猪死亡率较低，在猪群中得传播速度相对缓慢。1971年首次在英国发现，主要引起架子猪和育肥猪急性腹泻，当时称为“猪流行性病毒性腹泻（epidemic virus diahorrea EVD）”。随后该病在许多国家，如比利时、荷兰、德国、法国、匈牙利、前苏联以及日本等均有发生。1982年将该病统一命名为猪流行性腹泻（PED）。我国至20世纪80年代以来陆续有本病发生的报道，并分离到病毒（宁宜宝.兽用疫苗学.北京:中国农业出版社.2008.11:258-260）。PED和TGE在病毒抗原形态、临床症状、流行病学上极其相似，唯免疫学和血清学相互没有交叉反应。哈尔滨兽医研究所对TGE和PED两种病毒抗原结构蛋白的分析研究证明，两种病毒抗原差异在纤突蛋白上，PED是独立的猪急性肠道传染病（刘矿.猪传染性胃肠炎和流行性腹泻病毒的分离、鉴定及部分基因序列分析.11-13）。

PEDV为冠状病毒科（Coronaviridae）冠状病毒属（Coronavirus）的成员，目前发现只有一个血清型。PEDV可在猪群中持续存在，各种年龄的猪都易感。哺乳仔猪、架子猪和育肥猪的发病率可达100%，尤其以哺乳仔猪严重。母猪的发病率在15%～90%。本病主要在冬季多发，夏季也可发生，我国从12月份至次年2月份为本病的高发期。病猪和带毒猪是主要传染源，病毒多经发病猪的粪便排出，运输车辆、饲养员的鞋子或其他带病毒的动物，都可作为传播媒介。自然感染开始于口部吸收病毒以后，主要经消化道传播，也有经呼吸道传播的报道。PED可单一发生或与TGEV混合感染，但以和TGEV的混合感染较为常见。

对于猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻这两种病的防控，国内外兽医工作者进行了大量的工作，目前尚无特效药物和疗法，主要是通过加强饲养管理和疫苗免疫等措施进行预防和控制。国外有多种弱毒疫苗使用，接种的途径也不一样。国内猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻二联活疫苗，病毒培养的细胞基质多为原代细胞，而原代细胞由多种类型的细胞组成，细胞种类比较复杂，细胞间特性存在差异，动物的个体间存在差异，存在难以保证细胞质量的一致性、外源致病微生物污染的风险大、生产成本高等缺点，给疫苗产量、效力的提高带来困难，难以满足大规模生产。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供本发明人自行致弱、保存的一株适应于猪睾丸细胞系（ST细胞）的猪传染性胃肠炎病毒株和一株适应于非洲绿猴肾细胞系（Vero细胞）的猪流行性腹泻病毒株，利用两株病毒制备一种猪传染性胃肠炎、流行性腹泻二联活疫苗，用于有效预防猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻两种疾病。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案在于：