[发明专利]一种利用基因重组酵母混合培养将纤维素转化为乙醇的方法有效
| 申请号： | 201310033476.0 | 申请日： | 2013-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN103103221A | 公开（公告）日： | 2013-05-15 |
| 发明（设计）人： | 刘泽寰;林蒋海;胡佳;黎惠忠;李晶博;龚映雪;肖文娟 | 申请（专利权）人： | 广州分子生物技术有限公司;暨南大学 |
| 主分类号： | C12P7/10 | 分类号： | C12P7/10 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510320 广东省广州市广州国际生*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 基因 重组 酵母 混合 培养 纤维素 转化 乙醇 方法 | ||
1. 一种利用基因重组酵母混合培养将纤维素转化为乙醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.种子液的制备：首选分别构建能分泌表达内切葡聚糖酶EG的菌株AS2.489-PS-EG、能分泌表达外切葡聚糖酶CBH的菌株AS2.489-PS-CBH和能分泌表达β-葡萄糖苷酶BGL的菌株AS2.489-PS-BGL；然后活化培养各菌株至对数生长期，并使各菌株的酵母细胞数达到0.8~1亿/mL，即为成熟种子液；
S2.配制发酵培养基并灭菌，所述培养基含有如下重量份的组分：100~200份蔗渣，20~40份玉米浆，10~30份葡萄糖，5~15份硫酸铵，1~10份磷酸二氢钾；
S3.接种：将AS2.489-PS-EG、AS2.489-PS-CBH和AS2.489-PS-BGL的成熟种子液混合后，于无菌条件下接种，总接种量为培养基体积的8~15%；
S4. 发酵：前酵期通入无菌空气，控制温度为28~32°C，搅拌速度为150~250转/分钟，搅拌培养3~5小时,前酵期结束;然后进入主酵期厌氧发酵阶段,主酵期保持温度为28~32°C，停止通气并保持50~100转/分钟的缓慢搅拌，发酵2~4天；整个发酵过程中控制pH为3.5~4.5。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S3所述的接种是将AS2.489-PS-EG、AS2.489-PS-CBH和AS2.489-PS-BGL的成熟种子液按1~5：1~5：1~5的体积比混合。
3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S3所述的接种是将AS2.489-PS-EG、AS2.489-PS-CBH和AS2.489-PS-BGL的成熟种子液按1~3：1~3：1~3的体积比混合。
4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，S3所述的接种是将AS2.489-PS-EG、AS2.489-PS-CBH和AS2.489-PS-BGL的成熟种子液按1： 3： 2的体积比混合。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S3所述的接种量为培养基体积的12%。
6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，培养基含有如下重量份的组分：120~180份蔗渣，25~30份玉米浆，15~20份葡萄糖，5~10份硫酸铵，2~6份磷酸二氢钾。
7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于，培养基含有如下重量份的组分：150份蔗渣，28份玉米浆，18份葡萄糖，7份硫酸铵，4份磷酸二氢钾。
8. 根据权利要求1、6或7所述的方法，其特征在于，所述培养基中的蔗渣经机械粉碎至150~250目。
9. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S4中前酵期控制温度30°C，搅拌速度为200转/分钟，搅拌培养4小时；主酵期保持温度为30°C，发酵3天。
10. 根据权利要求1或9所述的方法，其特征在于，S4整个发酵过程中控制pH为4.0。
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