[发明专利]一种柑橘全爪螨若螨的RNA干扰方法

权利要求书

1.一种柑橘全爪螨若螨的RNA干扰方法，其特征在于：按照如下步骤完成：

(1)、柑橘全爪螨若螨的饲养

在培养皿内制成梯级滤纸隔离台，取洗净的柑橘叶片，将叶面向下置于滤纸隔离台上，用湿脱脂棉条压住叶沿，在叶片上接种橘全爪螨雌成螨，产卵24h后去除雌成螨，所雌成螨产的卵置于恒温光照培养箱中，控制温度为25±1℃，相对湿度为70％-80％，光周期为L∶D=(14∶10)h连续培养5-7天，得到柑橘全爪螨若螨。

(2)、对柑橘全爪螨若螨进行dsRNA溶液处理

将孵化的若螨挑在新的叶片上，在处理好的叶片上滴一滴dsRNA溶液，用0号毛笔将幼螨逐个轻轻挑于液滴上，浸5s后挑出，将浸过液的若螨置于恒温光照培养箱中控制温度为25±1℃，相对湿度为70％-80％，光周期L∶D=(14∶10)h培养24h。所用dsRNA溶液为shRNA1溶液，其中shRNA1的碱基序列为：shRNA1：5′-GATCGTCTGTTATTTCACC-3′    SEQ NO 1shRNA1溶液浓度为2.0-6.0μg/ml；

(3)、测定处理后柑橘全爪螨若螨蜕皮及存活情况

记录喂食dsRNA溶液后的柑橘全爪螨若螨的蜕皮及存活情况，评价RNA干扰效果。

2.根据权利要求1所述的一种柑橘全爪螨若螨的RNA干扰方法，其特征在于：所述步骤(1)中，梯级滤纸隔离台通过取直径为9cm的培养皿铺上0.7cm厚的海绵，海绵上铺直径略小于海绵的滤纸，加水至滤纸边缘，制成梯级水隔离台。

3.根据权利要求1所述的一种柑橘全爪螨若螨的RNA干扰方法，其特征在于：所述步骤(1)中，柑橘叶片为刚采摘完整、生长旺盛的柑橘叶片。

4.根据权利要求1所述的一种柑橘全爪螨若螨的RNA干扰方法，其特征在于：所述步骤(2)中，dsRNA是通过几丁质酶和绿色荧光蛋白的cDNA序列，设计合成的双链RNA。