[发明专利]一种用RNA病毒转化植物原生质体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用RNA病毒转化植物原生质体的方法。

背景技术

甜菜丛根病是危害甜菜的重要病害，目前已成为世界各甜菜产区的一种毁灭性病害，尤其对甜菜产量和含糖量影响极大。近年来该病害在内蒙古、甘肃、新疆和黑龙江等主要甜菜产区都有不同程度的发生，严重影响我国甜菜制糖业的发展。该病害的病原物是甜菜坏死黄脉病毒（Beet necrotic yellow vein virus,BNYVV），该病毒是Benyvirus属的代表病毒，由甜菜多粘菌（Polymyxa beta）传播（Tamada，T and Baba,T.Beet necrotic yellow vein virus from rhizomania-affected sugar beet in Japan.Ann PhytopatholSoc Japan.1973,39:325-332）。BNYVV是正义RNA多分体病毒，其基因组由4~5条RNA组成，分别包装在不同长度的杆状病毒粒子中。其中RNA1和RNA2编码“持家基因”，是病毒侵染各种寄主所必需的，而RNA3和RNA4不是病毒所必需的（Bouzoubaa,S.,Niesbach-Klosgen,U.,Jupin,I.,Guilley，H.,Richards,K.,and Jonard,G.Shotrened forms of Beet necrotic yellow vein virus RNA-3and-4:internal deletions and a subgenomic RNA.Journal of General Virology，1991,72:259-226）。BNYVV仅RNA1和RNA2就可以系统侵染本生烟，其中RNA2编码的P14是其系统运动所必需的，其他小组分RNAs的系统运动能力和致病性各有不同。分子实验证实含有RNA4的BNYVV田间分离物接种本生烟时可产生严重症状，即新生叶下卷，植株矮化（Rahim M.D.,Andika I.B.,Han C.G H.,and Tamada T.RNA4-encoded p31ofBeet necrotic yellow vein virus is involved in efficient vector transmission,symptom severity and silencing suppression in root.Journal of General Virology，2007,88:1611-1619）。野生型RNA3在本生烟的选择压下更快地产生内部缺失型RNA3，并且缺失型的RNA3与本生烟的严重症状相关，而RNA5则极易在系统叶上发生自我丢失（Wang Ying，Fan Huiyan，Wang Xian-Bing，Li Min，Han Chenggui，Li Dawei，Yu Jialin.Detection and characterization of spontaneous internal deletion mutants of Beet Necrotic yellow vein virus RNA3from systemic host Nicotianabenthamiana.Virology Journal,2011,8:355）。之前由于接种体系的限制，BNYVV的相关研究都主要集中在田间寄主甜菜或其他一些枯斑寄主（昆诺藜或者番杏）上进行，而其与病毒系统侵染模式植物本生烟的研究还有待进一步深入。