[发明专利]调整禽畜肠道菌群益生菌微生物菌剂及制备方法

说明书

技术领域

    本发明涉及一种调整禽畜肠道菌群益生菌微生物菌剂及制备方法，具体说，是一种调整禽畜肠道菌群结构、取代抗生素预防禽畜肠道疾病及呼吸道疾病的益生菌菌剂及其制备方法。

背景技术

现在已有不少关于养殖业为了防止禽畜发病滥用抗生素、滥用兽药的报道，不仅养殖成本增加，而且导致牛奶、鸡蛋和各种肉产品品质下降，不健康风险增加、严重影响养殖业的持续发展。但是，在养殖业中由于多是集约式养殖，养殖环境和周边环境质量差，禽畜容易产生呼吸道、肠道疾病，市场迫切需要一种无残留、无毒性、成本低的饲料添加剂，取代抗生素、有害兽药，以保证养殖禽畜健康生长，从而提高禽畜产品的品质和质量。益生菌菌剂正是无残留、无毒性，以调整禽畜肠道菌群结构为目标，而达到预防肠道疾病和呼吸道疾病的目的。在养殖周期内，除了必要的免疫外，可以不用抗生素和兽药。  

发明内容

本发明的目的是提供一种调整禽畜肠道菌群益生菌微生物菌剂及制备方法，该菌剂能调整禽畜肠道菌群结构，促进益生菌生长，抑制有害菌生长，可以提高饲料利用率，能明显降低禽畜排泄物的臭味，改善养殖生态环境和周边环境，高效、无毒、无残留，能广泛应用于禽畜饲料添加剂，预防禽畜肠道疾病和呼吸道疾病。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：这种调整禽畜肠道菌群益生菌微生物菌剂，由产朊假丝酵母（Candida utilis）、粪链球菌（Streptococcus feacalis）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）和沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas palustris）6种菌组成，经过三级液体发酵，再将扩大培养发酵菌液与麦麸均匀混合，经固体发酵，低温干燥而制备的调整禽畜肠道菌群结构的益生菌菌剂。

这种调整禽畜肠道菌群益生菌菌剂的制备方法包括以下步骤：

（1）按微生物发酵工程工艺，先将斜面保存产朊假丝酵母菌种用马铃薯培养基PDA活化，经三级逐级扩大培养，制备成产朊假丝酵母的一级种子菌液；同理，粪链球菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌5种细菌分别用牛肉膏蛋白胨培养基活化，经过三级逐级扩大培养，制备成粪链球菌等5种细菌的一级种子菌液；

（2）将产朊假丝酵母和粪链球菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌5种细菌的一级种子菌液用玉米粉-豆粕-马铃薯-蔗糖培养基进行二级、三级扩大培养；

所述二级扩大培养条件： 将热带假丝酵母和粪链球菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌5种细菌的一级种子液等体积混合，按接种量质量比1:10 的6种菌的一级种子混合菌液，温度30℃，转速100-200r/min，,压力0.05MPa，发酵20-24h， 在无菌条件下抽取10mL发酵液，稀释100倍，检查波长660nm吸光值OD，OD达到0.6-0.8后，再转入三级扩大培养阶段；

所述三级扩大培养条件：按接种量质量比1:10二级扩大培养液，温度28-30℃，转速200-300r/min，压力0.05MPa，发酵20-24h, 抽取10mL发酵液，稀释100倍，检查波长660nmOD值，OD达到0.6-0.8后，停止培养，有效菌菌落数用平板稀释法在1*10¹⁰cfu.mL^-1以上，cfu-菌落数。

这种调整禽畜肠道菌群益生菌菌剂的制备方法，所述玉米粉-豆粕-马铃薯-蔗糖培养基组成按质量份数为：玉米粉20-30份，豆粕1-2份，马铃薯10-20份，蔗糖2份，氯化钠0.5份，磷酸氢二钾0.5份，硝酸钾10份，硫酸镁0.5份，硫酸亚铁0.002份，自来水1000份，用过饱和氢氧化钙调节pH值7.4-7.6。

这种调整禽畜肠道菌群益生菌菌剂的制备方法，所述菌剂所用菌种安全、可靠，购买于中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心，都是农业部饲料添加剂允许使用菌种。发酵生产过程中全部用不锈钢发酵罐完成，无废气、废物、废水产生，无重金属污染。产品作为饲料添加剂，符合农业部有关饲料添加剂的标准要求。