[发明专利]一种灰葡萄孢特异性PCR检测方法无效
申请号: | 201310027722.1 | 申请日: | 2013-01-24 |
公开(公告)号: | CN103146812A | 公开(公告)日: | 2013-06-12 |
发明(设计)人: | 张静;范璇;李国庆;杨龙 | 申请(专利权)人: | 华中农业大学 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645 |
代理公司: | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人: | 王敏锋 |
地址: | 430070 湖*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 葡萄 特异性 pcr 检测 方法 | ||
1.一种灰葡萄孢特异性PCR检测方法,其步骤为:
1)CTAB法提取样品真菌菌丝基因组DNA;
2)PCR法扩增,PCR反应体系具体为:样品基因组DNA 1μL;10×PCR buffer 2.5μL;2.5mM dNTP Mixture 0.5μL;5U/μL rTaq酶0.25μL;一对20μM引物分别0.5μL;ddH2O 19.75μL;总体系25μL;PCR反应程序具体为:94℃预变性5min;94℃变性30s,56℃退火30s,72℃延伸1min,27个循环;72℃延伸10min;降温至16℃维持5min;
所述引物对为:
B1SE11f:5’–CAGGAAACACTTTTGGGGATA–3’;
B1SE11r:5’–GAGGGACAAGAAAATCGACTAA–3’ ;
3)凝胶电泳检测扩增产物,EB染色观察,在327bp处存在单一扩增条带表明样品中含灰葡萄孢。
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