[发明专利]用于检测NLRP7基因的基因芯片、检测试剂和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因芯片、其检测试剂和试剂盒，尤其涉及一种用于检测NLRP7基因的基因芯片、检测试剂和试剂盒。

背景技术

葡萄胎（Hydatidiform Mole，HM）是最常见的妇科疾病，是一种异常的人类妊娠，以绒毛间质水肿、滋养细胞增生同时缺乏胚胎发育或者异常的胚胎发育为特征。葡萄胎最常见的是散发性，而非复发性，在南美葡萄胎的发生率为每1000-1500次妊娠1次，但在拉丁美洲，中东及远东有更高的发生率。我国和东亚地区是葡萄胎的高发区，发生率为北美和欧洲国家的7-10倍，中国以浙江省为最高，为每120-700次妊娠1次；葡萄胎患者妊娠结局令人担忧，在有一次葡萄胎经历的妇女中，根据不同的人群有1-6%会再患葡萄胎，有10-20%会罹患自然流产等不良妊娠生育结局；二次葡萄胎后则有20-30%的再患葡萄胎概率。因此葡萄胎不是独立的疾病，它同样适合任何形式的生育结局不良。复发性的生育结局不良对年轻夫妇的身心打击是巨大的； 同时也造成消耗大量的卫生资源（在北美，由于反复就诊及大量的实验室检查，使得每对夫妇至少化费50，000美元，在中国同样费用高昂）；此外尚有15-20%的葡萄胎会恶变为妊娠滋养细胞肿瘤，甚至危及患者的生命。

人们从未在动物身上发现过葡萄胎，因此通过建立动物模型获悉数据的可能性很小，先前有关葡萄胎发生的分子机制的研究集中在家族性复发性葡萄胎（Familial Recurrent Mole，FRM），FRM 是指在一个家系中两个或以上的家族成员反复发生葡萄胎，属孟德尔常染色体隐性遗传性疾病，其确切的发生率不明，但比较罕见。我们的合作者SLIM团队率先对FRM进行了遗传学研究，首次报道了FRM染色体双亲来源的遗传背景，并确定了其遗传易感基因的侯选区域定位于染色体19q13.3—19q13.4区域（5）；2006 年，SLIM团队通过基因克隆与定位的方法发现了第一个与复发性葡萄胎及不良生育结局相关的致病基因NLRP7基因（其基因序列如SEQ ID NO.1所示），至今，多个研究机构报道了在不同人种的复发性葡萄胎患者中已发现62个不同的NLRP7基因突变位点（见INFEVERS， http://fmf.igh.cnrs.fr/ISSAID/infevers/），在SLIM实验室，大约60%的复发性葡萄胎患者存在NLRP7基因突变。证明了NLRP7基因是复发性葡萄胎重要的发病相关基因。这些变异包括终止子的改变，重排，小的缺失，插入，接合子改变及无义突变。NLRP7基因双位点突变导致二倍体双亲来源的葡萄胎。至今，来自不同实验室已报道了39例NLRP7基因双位点突变所致葡萄胎均是二倍体双亲来源的葡萄胎。NLRP7基因单位点突变可致各种核型葡萄胎。NLRP7基因突变导致合子后分裂异常。NLRP7基因突变与各种类型的妊娠丢失相关。最近研究发现，大约13%的散发性葡萄胎患者存在NLRP7基因突变，大约8%的复发性流产患者存在NLRP7基因突变，同时在一些普通人群中偶见NLRP7基因非同义突变，这些人常为复发性妊娠丢失的易感人群。男性NLRP7基因突变不改变生育结局。、有关NLRP7基因功能研究：NLRP7是胞浆蛋白，包含了三个主要的功能区域，是NLRP7家族14个成员中的一员，属于CATERPILIER家族的亚家族，CATERPILIER被认为与主动免疫、凋亡和病原诱导的炎症的细胞内调节有关。至今NLRP7家族中已有5个基因发现与数种人类疾病密切相关，全都涉及多系统的感染； NLRP基因族被认为介导激活宿主先天免疫系统对所谓的抗原相关分子模式（PAMPs） 诸如细菌来源的产物作出反应； NLRP 蛋白募集其它衔接蛋白行成蛋白复合物形成炎症小体，炎症小体激活前CASPASE-1使其在在IL-1β116位天冬氨酸处切开才能使IL-1β成为成熟形式并促使其分泌到细胞外；分泌的 IL-1β介导激活其它的细胞因子并募集淋巴细胞到感染部位对抗病原微生物及引起组织损伤。同样的，作为NLRP7家族成员之一，在唯一的一个体外研究中发现NLRP7基因抑制IL-1β及CASPASE-1前体的加工，并且具有抑制Caspase-1依赖性的IL-1β的分泌的作用；革兰氏阴性菌细胞壁成份脂多糖（LPS）与IL-1β可以增加外周血单个核细胞的NLRP7基因表达，NLRP7基因表达增强可以反馈调节抑制了IL-1β的分泌，因此NLRP7可以抑制LPS 诱导的IL-1β的分泌。目前Slim团队体外研究发现NLRP7基因突变者外周血淋巴细胞对各种炎症刺激受损及分泌较低水平的IL-1和TNF，推测炎症反应受损后使得胚胎发育停止或异常，机体耐受绒毛水肿变性及葡萄胎的发生。