[发明专利]一种家蚕浓核病毒LAMP可视化快速检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于分子诊断和鉴定技术领域，具体地，涉及一种家蚕浓核病毒LAMP可视化快速检测试剂盒及其检测方法。 

背景技术

家蚕是鳞翅目模式昆虫，具有重要的经济价值，蚕丝及其织物是我国传统的出口创汇物质。家蚕浓核病毒（Bombyx mori densovirus，BmDNV）是我国蚕茧生产中普遍发生的病毒病的病原，严重威胁着蚕丝业的持续稳定生产。 

家蚕病毒病除血液型脓病发病较快外，均属慢性传染病。蚕在感病初期外观无任何症状，一般要在感病后4～5天才出现症状，但此时已接近晚期。病蚕是通过带病毒的蚕粪传染的，因此及早进行预知检测和诊断，并采取一定的防控措施，可防止病毒病的扩散与蔓延。 

目前家蚕浓核病毒的主要检测方法有特异病症观察法、免疫血清学方法、PCR方法等，其中免疫血清学采用双向免疫扩散法（DID）、对流免疫电泳法（CIEP）、酶联对流免疫电泳法（ELCIEP）、酶标组化法（IEHC）、可溶性酶-抗酶法（PAP）、斑点免疫结合测定法（DIBA）、生物素-亲和素系统检测法（ABS）以及胶乳凝集试验法（LTA）等方法进行检测，但这些方法存在病毒分离繁琐、代价高、灵敏性地、特异性差、确诊缓慢等因素，在生产检测诊断应用中存在一定的局限性。尽管PCR方法应用于浓核病毒的检测，在检测灵敏度上有一定的改进，但由于需要精密的仪器和设备配套使用，仍然无法满足蚕业生产和现场检测的需要（王裕兴，曹诒孙，钱元骏等. 酶对流免疫电泳对家蚕浓核病的早期诊断技术. 蚕业科学，1983，9(2):97-102）；钱元骏，胡雪芳，王红林. 家蚕病毒病血清诊断实用化研究. 蚕业科学，1984，10(3):155-157；Kageyasu S, Hayakawa T, Isawa H et al．Detection of the Silkworm-pathogenic virus genomes by PCR．Journal of Sericultural Science of Japan，1997，66(6):477-483；韩序，姚勤，高路等，家蚕浓核病毒（中国镇江株）在不同感受性宿主体内的复制. 生物工程学报，2007，23(1):145-151；付艳红，唐顺明，覃光星等.家蚕浓核病毒中国（镇江）株基因组的克隆及重组质粒转染家蚕对浓核病毒的拯救. 蚕业科学，2008，34(3):453-458；余蔚，姚勤，郭忠建等. 家蚕浓核病毒中国株非结构蛋白1(NS1)的表达. 微生物学报，2008，48(2):191-196）。 

环介导核酸等温扩增法（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP）是日本学者Notomi等（2000）发明的一种新型体外等温扩增特异核酸判断的技术（Notomi T, Okayama H, Masubuchi H et al.. 2000. Loop-mediated isothermal amplification of DNA. Nucleic Acids Research, 28(12): e63）。随着LAMP技术的发展，该技术已成功应用于人类和动植物病毒、细菌以及寄生虫等引起的疾病诊断和快速检测（杨丽，何晓青，韦玉梅等. 环介导等温扩增技术(LAMP)检测人星状病毒方法的建立及其在再生水检测中的应用.生态毒理学报,2011,6(6):600-606；Diaeldin A. Salih & Awadia M. Ali & Zhijie Liu et al.Development of a loop-mediated isothermal amplification method for detection of Theileria lestoquardi. Parasitol Res.2012，（110）:533-538）。 

    LAMP法具有特异性强，敏感性高，操作简便，快速、高效等优点，通过肉眼观察产物颜色变化即可判断结果，从而简化了检测过程，不需要特殊仪器，检测时间也大大缩短，适宜于现场快速检测和诊断。目前尚未见应用LAMP法检测家蚕浓核病毒BmDNV的相关技术报道。 

发明内容

本发明的目的是克服现有家蚕浓核病毒BmDNV检测技术的不足，提供一种家蚕浓核病毒LAMP可视化快速检测试剂盒。 

    本发明的另一个目的是提供一种家蚕浓核病毒LAMP可视化快速检测试剂盒的检测方法。 

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：