[发明专利]一种醛脱氢酶及其制备方法

权利要求书

1.醛脱氢酶Fwaldh的生产菌株为太平洋火色杆菌(Flammeovirga Pacifica)H2，该菌株已于2012年6月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2012229。

2.醛脱氢酶基因fwaldh的序列(SEQ ID No.1)如下：

SEQ ID No.1的信息：

1)名称：Flammeovirga Pacifica醛脱氢酶基因；

2)分子类型：DNA；

3)序列特征：

A)长度：1440bp；

B)类型：核酸；

C)链性：双链；

D)拓扑结构：线性。

3.醛脱氢酶基因fwaldh编码的醛脱氢酶Fwaldh的氨基酸序列(SEQ ID No.2)如下：

SEQ ID No.2的信息：

1)名称：Flammeovirga Pacifica醛脱氢酶；

2)分子类型：蛋白质；

3)序列特征：

A)长度：479aa；

B)类型：氨基酸。

4.醛脱氢酶Fwaldh的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)克隆所述醛脱氢酶基因fwaldh；

2)将所述醛脱氢酶基因fwaldh插入表达载体，构建携带所述醛脱氢酶基因fwaldh的重组表达载体；

3)将所述重组表达载体转化到E.coli BL21中；

4)选取转化后E.coli BL21中的阳性克隆于培养基中进行发酵培养；

5)离心收集发酵后的E.coli BL21细胞，重悬所述E.coli BL21细胞于裂解缓冲液中进行裂解；

6)将步骤5)中裂解后的悬液进行离心，收集上清液；

7)将上清液与Ni-NTA Agarose混匀，按照纯化试剂盒说明书进行纯化，即得所述醛脱氢酶Fwaldh。

5.如权利要求4所述醛脱氢酶Fwaldh的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述表达载体为pET-His载体。

6.如权利要求4所述醛脱氢酶Fwaldh的制备方法，其特征在于在步骤4)中，所述培养基为含有100μg/mL氨苄青霉素的LB培养基。

7.如权利要求6所述醛脱氢酶Fwaldh的制备方法，其特征在于所述培养基，当诱导时补加100μg/mL氨苄青霉素。

8.如权利要求4所述醛脱氢酶Fwaldh的制备方法，其特征在于在步骤4)中，所述发酵条件为：37℃下振荡培养至A₆₀₀＝0.6，加入异丙基硫代-β-D-半乳糖苷至终浓度为50μg/mL，并添加0.2％葡萄糖，而后于28℃诱导至A₆₀₀＝0.8，再改至在16℃诱导至A₆₀₀＝1.2。

9.如权利要求4所述醛脱氢酶Fwaldh的制备方法，其特征在于在步骤5)中，所述裂解缓冲液配方为：0.3mol/L NaCl，10mmol/L咪唑，50mmol/L NaH₂PO₄，pH 8.0。

10.如权利要求4所述醛脱氢酶Fwaldh的制备方法，其特征在于在步骤6)中，所述离心的条件为18000g，离心20min。