[发明专利]一种灵敏度增强型金标免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种金标免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)是上世纪80年代继荧光素、放射性同位素和酶标技术后发展起来的固相标记免疫测定技术。免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

免疫胶体金技术具有以下优点：

(1)使用方便快速，便于基层使用和现场使用，所有反应能在15分钟内完成；

(2)成本低，不需要特殊的仪器设备；

(3)应用范围广，可适应多种检测条件；

(4)可以进行多项检测，若阳性样本比较难获得，多项检测可以节省样品，降低成本；

(5)标记物稳定，标记样品在4℃贮存两年以上，无信号衰减现象；

(6)胶体金本身为红色，不需要加入发色试剂，省却了酶标的致癌性底物及终止液的步骤，对人体无毒害。

胶体金作为免疫标记物始于1971年，由Faulk和Taylor将其引入免疫化学。Faulk和Taylor首先将兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门氏菌的表面抗原。此后，他们还把胶体金与抗胶原血清、植物血凝素、卵白蛋白、人免疫球蛋白轻链、牛血清白蛋白结合应用。1974年Romano和他的同事们将胶体金标记在马抗人的IgG上，实现了间接免疫金染色法。层析法检测试剂最早出现于1988年，是Unipath公司利用染料颗粒开发生产的一种非常方便使用的怀孕检测试剂。1989年，Spielberg F等发展了以胶体金为标记物用于检测艾滋病毒抗体的渗滤法检测试剂，此后，免疫胶体金在快速检测试剂中得到了广泛的应用和发展，相伴随的层析法检测试剂在组成结构、生产用的材料等方面也取得了长足的进步。

目前胶体金标记检测技术已广泛应用于医学临床诊断，以及食品药品卫生检验中，如早孕、乙肝、寄生虫、兴奋剂、抗生素的检测。该方法最大的特点是单份测定、简单快速、特异灵敏、成本低廉，不使用任何仪器，检测结果肉眼判读，并可保存检测结果。目前市场上普遍存在的金标试纸条由塑料如PVC背板以及在背板上依次粘贴的样品加样垫、金标抗体垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组成。

目前的金标试纸条都存在灵敏度低的不足，因此目前市场上迫切需要一种灵敏度高的金标试纸，以进一步拓宽金标试纸条的应用范围和领域。

发明内容

本发明针对现有的金标试纸条的灵敏度不高的研究现状，提供一种灵敏度增强型金标免疫层析试纸条，试纸条背板上依次粘贴样品加样垫、金标抗体垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中在所述试纸条背板上还可以含有pH修正缓冲垫、促反应缓冲垫和促释放缓冲垫中的至少一种，pH修正缓冲垫在样品加样垫和金标抗体垫之间，促反应缓冲垫和促释放缓冲垫在金标抗体垫和硝酸纤维素膜之间。各种垫之间的粘贴通过背板上的胶；背板可以是本领域技术人员所熟知的用于金标免疫层析试纸条背板的各种材料，诸如可以是塑料例如PVC、PE和PP等等。

pH修正缓冲垫、促反应缓冲垫和促释放缓冲垫能够调整不同样本pH和延缓释放速度、有效延长待测品中抗原与试纸条中金标抗体的反应时间，使抗原与抗体的结合更加充分，进而提高检测的灵敏度；其中pH修正缓冲垫的作用在于修正待测样品自身的pH条件，使层析过程处于抗原与抗体反应最适pH状态下；促反应缓冲垫的作用在于延长抗原与抗体反应时间，促进抗原与抗体充分反应；促释放缓冲垫的作用在于利用较高浓度表面活性剂加速金标抗体抗原复合物的释放。

在一种实施方式中，试纸条背板上依次粘贴样品加样垫、pH修正缓冲垫、金标抗体垫、促反应缓冲垫、促释放缓冲垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。