[发明专利]一种胃癌靶向重组毒素及其制备方法

权利要求书

1.一种胃癌靶向重组毒素，其特征在于胃癌靶向重组毒素的氨基酸序列是SEQ No.1。

2.如权利要求1所述的一种胃癌靶向重组毒素的制备方法，其特征在于包括下列步骤：

根据表达宿主密码子的偏爱性，优化基因并进行人工合成，将该基因进行Xba I与EcoR I双酶切，插入pET-28a载体，转化大肠杆菌Rosetta(DE3)，得到重组菌株Rosetta(DE3)(pET-rG17PE38)，该重组菌株经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导，目的蛋白获得高效表达。

3.如权利要求2所述的一种胃癌靶向重组毒素的制备方法，其特征在于所述基因的核苷酸序列如SEQ No.2所述。

4.如权利要求2所述的一种胃癌靶向重组毒素的制备方法，其特征在于所述诱导条件是：SOB培养基，1%接种量接种，160rpm 37℃摇培2h后加入终浓度为1.0 mM的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷IPTG，180rpm 30℃继续4.5h。

5.如权利要求2所述的一种胃癌靶向重组毒素的制备方法，其特征在于还包括蛋白纯化方法：

对所获得的目的蛋白，超声300W破碎5min，离心取上清；45%的硫酸铵沉淀后，0.4M硫酸铵、20mM Tris、pH7.4的缓冲液重悬，过滤后进行Phenyl FF线性纯化；目标蛋白峰收集液上DEAE Sepharose FF柱纯化，20mM Tris、1M NaCl、pH7.4缓冲液线性洗脱；目标蛋白峰收集液上Superdex75分子筛柱，最后收集目标蛋白峰。

6.如权利要求1所述的胃癌靶向重组毒素在制备抗胃癌的药物中的应用。